ई. कोलाई (एस्चेरिचिया कोलाई), जीकेबी, ओकेबी, टीकेबी। पेयजल राशनिंग के लिए कुल माइक्रोबियल गिनती

8.1. पोषक तत्व अगर पर उपनिवेश बनाने वाले सूक्ष्मजीवों की कुल संख्या का निर्धारण

8.1.1. एक संकेतक की अवधारणा की परिभाषा

पीने के पानी में विधि निर्धारित करती है कुल गणनामेसोफिलिक एरोबिक और ऐच्छिक अवायवीय सूक्ष्मजीव (एफएमसी) 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पोषक तत्व अगर पर कॉलोनियां बनाने में सक्षम हैं, जो 2 गुना आवर्धन के साथ दिखाई देते हैं।

8.1.2. विश्लेषण करना

प्रत्येक नमूने से, 1 मिली के कम से कम दो खंडों को टीका लगाया जाता है।

पूरी तरह से मिलाने के बाद, पानी के नमूनों को 1 मिली बाँझ पेट्री डिश में मिलाया जाता है, जिससे ढक्कन थोड़ा खुल जाता है। पानी डालने के बाद, (8-12) मिली (प्रति कप 90-100 मिमी के व्यास के साथ) पिघला हुआ और (45-49) डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया जाता है। जिसमें यह निहित है। फिर जल्दी से कप की सामग्री को मिलाएं, समान रूप से पूरे तल पर वितरित करें, हवा के बुलबुले के गठन से बचें, कप के किनारों और ढक्कन पर आगर हो जाएं। यह प्रक्रिया एक क्षैतिज सतह पर की जाती है, जहां प्लेटों को तब तक छोड़ दिया जाता है जब तक कि अगर ठोस न हो जाए।

विश्लेषण की अवधि के लिए पिघला हुआ अगर पानी के स्नान या थर्मोस्टेट में रखा जाता है जो (45-49) डिग्री सेल्सियस का तापमान बनाए रखता है।

आगर के जमने के बाद, संस्कृतियों वाली प्लेटों को थर्मोस्टेट में उल्टा रखा जाता है और (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस (24 ± 2) घंटों के तापमान पर इनक्यूबेट किया जाता है।

8.1.3. सम परिणाम

प्लेट पर उगाई गई सभी कॉलोनियों को 2 गुना आवर्धन पर प्रेक्षित किया जाता है। केवल उन व्यंजनों को ध्यान में रखा जाता है, जिन पर 300 से अधिक अलग-अलग कॉलोनियां नहीं उगाई गई हैं।

दोनों प्लेटों पर कॉलोनियों की संख्या को संक्षेप में दो से विभाजित किया जाता है। परिणाम परीक्षण पानी के नमूने के 1 मिलीलीटर में कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सीएफयू) की संख्या के रूप में व्यक्त किया जाता है।

यदि 2 प्लेटों में से किसी एक पर गिनती संभव नहीं है, तो परिणाम एक प्लेट पर कॉलोनियों की संख्या के आधार पर दिया जाता है। यदि दो प्लेटें फैलाना कॉलोनी विकास दिखाती हैं जो प्लेट की पूरी सतह को कवर नहीं करती है, या 300 से अधिक कॉलोनियां विकसित हो गई हैं और परख को दोहराया नहीं जा सकता है, तो डिश के क्षेत्र की गणना करें और फिर पूरी सतह की पुनर्गणना करें । इन मामलों में, प्रोटोकॉल "सीएफयू / एमएल की संख्या - लगभग" नोट करता है।

यदि प्लेटों पर कॉलोनी की गणना संभव नहीं है, तो प्रोटोकॉल पर "निरंतर विकास" रिकॉर्ड करें।

8.2. झिल्ली निस्पंदन (मुख्य विधि) द्वारा सामान्य और थर्मोटोलरेंट कोलीफॉर्म बैक्टीरिया का निर्धारण

8.2.1. एक संकेतक की अवधारणा की परिभाषा

सामान्य कोलीफॉर्म बैक्टीरिया (सीबीसी) ग्राम-नकारात्मक, ऑक्सीडेज-नकारात्मक, बीजाणु-मुक्त छड़ें हैं जो अंतर लैक्टोज मीडिया पर बढ़ने में सक्षम हैं, लैक्टोज को एसिड, एल्डिहाइड और गैस के लिए (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस (24- के लिए) के तापमान पर किण्वित करते हैं। 48) एच।

थर्मोटोलरेंट कोलीफॉर्म बैक्टीरिया (टीसीबी) सामान्य कॉलीफॉर्म बैक्टीरिया में से हैं, उनकी सभी विशेषताएं हैं और इसके अलावा, 24 घंटे के लिए (44 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एसिड, एल्डिहाइड और गैस में लैक्टोज को किण्वित करने में सक्षम हैं।

8.2.2. विधि सिद्धांत

विधि झिल्ली फिल्टर के माध्यम से पानी की एक निर्धारित मात्रा को छानने, लैक्टोज के साथ एक अंतर पोषक माध्यम पर फसल उगाने और सांस्कृतिक और जैव रासायनिक गुणों द्वारा उपनिवेशों की पहचान पर आधारित है।

8.2.3. विश्लेषण करना

8.2.3.1. अनुसंधान आदेश

पीने के पानी के अध्ययन में, 100 मिलीलीटर की 3 मात्रा का विश्लेषण किया जाता है।

यदि स्थिर नकारात्मक परिणाम प्राप्त होते हैं, तो एक फिल्टर के माध्यम से 300 मिलीलीटर पानी को फ़िल्टर किया जा सकता है।

अज्ञात गुणवत्ता के पानी को छानते समय, फिल्टर पर पृथक कॉलोनियों (उदाहरण के लिए, 10, 40, 100, 150 मिलीलीटर पानी) प्राप्त करने के लिए फ़िल्टर किए गए वॉल्यूम की संख्या बढ़ाने की सलाह दी जाती है।

पानी की मापी गई मात्रा को पैरा 7 में निर्धारित आवश्यकताओं के अनुपालन में झिल्ली फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है।

फिल्टर 5.4 के अनुसार तैयार किए गए एंडो माध्यम पर रखे गए हैं। फिल्टर वाले कप को थर्मोस्टेट में उल्टा रखा जाता है और (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस (24 ± 2) घंटों के तापमान पर इनक्यूबेट किया जाता है।

यदि फिल्टर पर कोई वृद्धि नहीं होती है या कॉलोनियां झिल्लीदार, स्पंजी, फफूंदीदार, पारदर्शी, अस्पष्ट हैं, तो वे एक नकारात्मक उत्तर देते हैं: परीक्षण पानी के 100 मिलीलीटर में ओकेबी और टीकेबी की अनुपस्थिति। विश्लेषण 24 घंटे के बाद पूरा हो गया है।

यदि फिल्टर पर पृथक विशिष्ट लैक्टोज-पॉजिटिव कॉलोनियों की वृद्धि पाई जाती है: गहरे लाल, धात्विक चमक के साथ या बिना लाल, या फिल्टर के पीछे एक छाप के साथ अन्य समान प्रकार की कॉलोनियां, प्रत्येक प्रकार की कॉलोनियों की संख्या गिनें अलग से और ओकेबी और टीकेबी से संबंधित होने की पुष्टि करने के लिए आगे बढ़ें।

OKB की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए, जाँच करें:

5 कॉलोनियों से कम होने पर सभी कॉलोनियां फिल्टर पर बढ़ीं;

प्रत्येक प्रकार की कम से कम 3-4 कॉलोनियां।

टीकेबी की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए, सभी विशिष्ट कॉलोनियों की जांच की जाती है, लेकिन 10 से अधिक नहीं।

प्रत्येक चयनित पृथक कॉलोनी की जांच की जाती है:

ऑक्सीडेज गतिविधि की उपस्थिति;

ग्राम संबद्धता (ग्राम-सना हुआ तैयारी या ग्रेगर्सन परीक्षण की माइक्रोस्कोपी);

लैक्टोज का अम्ल और गैस में किण्वन।

8.2.3.2. ऑक्सीडेज परीक्षण की स्थापना

फिल्टर पेपर की एक पट्टी को एक साफ पेट्री डिश में रखा जाता है और पैरा 5.7 के अनुसार ऑक्सीडेज परीक्षण अभिकर्मक की 2-3 बूंदों से सिक्त किया जाता है। तैयार पेपर सिस्टम को आसुत जल से सिक्त किया जाता है। एक ग्लास फोल्डर या प्लेटिनम लूप (निक्रोम मेटल लूप एक झूठी सकारात्मक प्रतिक्रिया दे सकता है) के साथ पृथक कॉलोनी का हिस्सा तैयार फिल्टर पेपर पर स्ट्रीक किया जाता है। प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है यदि स्ट्रोक का एक बैंगनी-भूरा (धारा 5.7.1 विकल्प 1) या नीला (धारा 5.7.2 विकल्प 2 और एनआईबी ऑक्सीडेज) धुंधला 1 मिनट के भीतर दिखाई देता है। एक नकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, संस्कृति के आवेदन के स्थल पर रंग नहीं बदलता है। सकारात्मक परिणाम के साथ, इस कॉलोनी को आगे के शोध से बाहर रखा गया है।

यदि, गहरे लाल रंग में रंगी हुई कॉलोनियों की जांच करते समय, एक अपर्याप्त स्पष्ट परिणाम प्राप्त होता है, तो संस्कृति को एंडो माध्यम से पोषक तत्व अगर में स्थानांतरित करना आवश्यक है। ऊष्मायन के बाद, परीक्षण दोहराया जाता है।

8.2.3.3. ग्राम से संबंधित का निर्धारण

ऑक्सीडेज-नेगेटिव कॉलोनी से एक स्मीयर लिया जाता है, ग्राम-दाग, और सूक्ष्म रूप से जांच की जाती है।

अल्कोहल से युक्त एक ग्लास स्लाइड पर, आसुत जल की 1 बूंद को लूप में लगाया जाता है, विश्लेषण की गई कॉलोनी से थोड़ी मात्रा में कल्चर जोड़ा जाता है और कांच की सतह पर फैला दिया जाता है। स्मीयर को कमरे के तापमान पर सुखाया जाता है और बर्नर की लौ के माध्यम से तीन बार तय किया जाता है। तैयारी के लिए फिल्टर पेपर की एक पट्टी लगाई जाती है और उस पर (0.5-1) मिनट के लिए वायलेट जेंटियन का एक कार्बोलिक घोल डाला जाता है, कागज को हटा दिया जाता है, लुगोल का घोल (0.5-1) मिनट के लिए डाला जाता है, लुगोल का घोल निकल जाता है और गिलास में धोया जाता है एथिल अल्कोहोल(0.5-1) मिनट के लिए, जब तक कि डाई निकलना बंद न हो जाए। फिर गिलास को पानी से अच्छी तरह से धोया जाता है और (1-2) मिनट के लिए ज़ील के फुकसिन के साथ दाग दिया जाता है, आसुत जल के साथ 1:10 पतला होता है। तैयारी को धोने और सुखाने के बाद, स्मीयर की सूक्ष्म जांच की जाती है।

ग्राम धुंधला के लिए अभिकर्मकों की तैयारी धारा 5.9 में वर्णित है।

ग्राम-नकारात्मक सूक्ष्मजीव गुलाबी हैं, ग्राम-पॉजिटिव नीले हैं। कोलीफॉर्म बैक्टीरिया ग्राम-नकारात्मक छड़ हैं।

ग्राम दाग को ग्रेगर्सन परीक्षण से बदला जा सकता है, जिसमें प्रकाशिकी के उपयोग की आवश्यकता नहीं होती है।

ग्रेगर्सन का परीक्षण: कांच की स्लाइड पर KOH के 3% जलीय घोल की एक बूंद में, एक ठोस माध्यम से लिया गया एक जीवाणु द्रव्यमान पायसीकारी होता है। लूप के साथ हिलाने के कुछ सेकंड के बाद, निलंबन श्लेष्मा बन जाता है और श्लेष्म धागे लूप के पीछे फैल जाते हैं, जो इंगित करता है कि परीक्षण संस्कृति या कॉलोनी एक ग्राम-नकारात्मक प्रजाति से संबंधित है। ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया में, श्लेष्म धागे नहीं बनते हैं - प्रतिक्रिया नकारात्मक होती है।

8.2.3.4. लैक्टोज किण्वन का निर्धारण

शेष ऑक्सीडेज-नकारात्मक ग्राम-नकारात्मक पृथक कॉलोनी को लैक्टोज माध्यम (पृष्ठ 5.6) के साथ दो टेस्ट ट्यूबों में समानांतर में बीज दिया जाता है:

OKB की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए, संस्कृति को 48 घंटों के लिए (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर इनक्यूबेट किया जाता है;

टीकेबी की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए, टीकाकरण (43-44) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पहले से गरम माध्यम में किया जाता है और 24 घंटे के लिए (44 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर इनक्यूबेट किया जाता है।

अर्ध-तरल मीडिया और एनआईबी (धारा 5.6) की पुष्टि पर एसिड और गैस के गठन के लिए प्राथमिक लेखांकन (4-6) घंटों के बाद संभव है। यदि एसिड और गैस का पता चला है, तो एक सकारात्मक उत्तर दिया जाता है। एसिड और गैस की अनुपस्थिति में या केवल एसिड की उपस्थिति में, टीकेबी की अंतिम गणना के लिए संस्कृतियों के साथ ट्यूब 24 घंटे तक छोड़ दी जाती है। 24 घंटे के बाद देखने और नकारात्मक परिणाम प्राप्त करने के बाद टीटीबी की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए फसलों के साथ ट्यूब 48 घंटे तक की अंतिम गिनती के लिए छोड़ दिया गया है।

यदि जांच की जाने वाली कॉलोनी छोटे आकार की है, तो इसे पोषक तत्व अगर तिरछा पर उपसंस्कृति करें और, (18-24) घंटों के लिए ऊष्मायन के बाद, सभी आवश्यक पुष्टिकरण परीक्षण करें।

8.2.3.5. कॉलोनी ओवरले या निरंतर वृद्धि में पुष्टिकरण परीक्षण करें

यदि कालोनियों या निरंतर वृद्धि को आंशिक या सभी फिल्टर सतह पर देखा जाता है, तो झिल्ली फिल्टर को फिल्टर से बड़े व्यास के फिल्टर पेपर के एक सर्कल पर रखकर, अभिकर्मक के साथ बड़े पैमाने पर सिक्त, या एक एनआईबी पर रखकर एक ऑक्सीडेज परीक्षण किया जाता है। आसुत जल से सिक्त ऑक्सीडेज डिस्क। जब प्रतिक्रिया के पहले लक्षण दिखाई देते हैं, लेकिन 5 मिनट से अधिक नहीं, झिल्ली फिल्टर को वापस एंडो माध्यम में स्थानांतरित कर दिया जाता है। प्रतिक्रिया की स्पष्ट अभिव्यक्ति के बाद, परिणाम निर्धारित किया जाता है। यदि बैंगनी-भूरा या नीला रंग दिखाई देता है (प्रयुक्त अभिकर्मक के आधार पर), तो ऑक्सीडेज परीक्षण सकारात्मक माना जाता है।

यदि फिल्टर पर सभी कॉलोनियां ऑक्सीडेज-पॉजिटिव हैं, तो उन्हें ध्यान में नहीं रखा जाता है और ओकेबी और टीकेबी की अनुपस्थिति के बारे में प्रतिक्रिया देते हैं और विश्लेषण पूरा करते हैं।

एक नकारात्मक ऑक्सीडेज प्रतिक्रिया के मामले में, अलग-अलग कॉलोनियों को प्राप्त होने तक छलनी की जाती है और ओकेबी और टीकेबी से संबंधित होने की पुष्टि पैराग्राफ 8.2.3.3-8.2.3.4 (गुणात्मक विश्लेषण) के अनुसार की जाती है।

8.2.4। परिणामों के लिए लेखांकन

8.2.4.1. ग्राम-नकारात्मक कॉलोनियों को नकारात्मक ऑक्सीडेज परीक्षण के लिए टीबीसी के रूप में गिना जाता है और एसिड और गैस का उत्पादन करने के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर लैक्टोज किण्वन होता है।

ग्राम-नकारात्मक कॉलोनियों को एक नकारात्मक ऑक्सीडेज परीक्षण में टीकेबी और एसिड और गैस उत्पादन के साथ 44 डिग्री सेल्सियस पर लैक्टोज किण्वन के रूप में गिना जाता है।

8.2.4.2. सभी फिल्टर पर सामान्य और थर्मोटोलरेंट कोलीफॉर्म बैक्टीरिया की अनुपस्थिति में, परिणाम "100 मिलीलीटर में टीसीबी का कोई सीएफयू" और "100 मिलीलीटर में टीसीबी का कोई सीएफयू नहीं" के रूप में दर्ज किया जाता है।

8.2.4.3. सभी विकसित संदिग्ध कॉलोनियों की पहचान के मामले में, टीकेबी और टीकेबी की कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों की संख्या सभी फिल्टर पर गिना जाता है और सीएफयू विश्लेषण का परिणाम 100 मिलीलीटर पानी में व्यक्त किया जाता है।

गणना सूत्र के अनुसार की जाती है:

एक्स 100 मिलीलीटर में कॉलोनियों की संख्या है;

फ़िल्टर के माध्यम से पानी की फ़िल्टर की गई मात्रा जिस पर खाता रखा गया था;

a इन फ़िल्टरों पर गिने जाने वाली कॉलोनियों की कुल संख्या है।

1. 100 मिली के 3 फिल्टर बोते समय 100 मिली में दो कॉलोनियां बढ़ीं, बाकी दो फिल्टर पर कोई ग्रोथ नहीं हुई। कुल या थर्मोटोलरेंट कोलीफॉर्म की संख्या होगी:

100 मिली . में सीएफयू ओकेबी (टीकेबी)

2. 40 मिलीलीटर की फ़िल्टर्ड मात्रा के साथ फिल्टर पर 10, 40, 100 और 150 मिलीलीटर की बुवाई करते समय, 4 पृथक कॉलोनियां बढ़ीं, जिनमें 100-3 ओकेबी की फ़िल्टर्ड मात्रा थी। 10 मिली और 150 मिली की मात्रा वाले फिल्टर अतिवृद्धि हैं और लेखांकन के अधीन नहीं हैं। उन फिल्टरों पर ओकेबी (टीकेबी) कॉलोनियों की कुल संख्या जहां पृथक कॉलोनियां प्राप्त की गई थीं, को सारांशित किया गया है और 100 मिलीलीटर की मात्रा के लिए पुनर्गणना की गई है।

100 मिली . में सीएफयू

8.2.4.4. यदि, एक ही प्रकार की कॉलोनियों की चयनात्मक जाँच के दौरान, असमान परिणाम प्राप्त होते हैं, तो इस प्रकार की कॉलोनियों के बीच OKB या TKB की संख्या की गणना सूत्र के अनुसार की जाती है:

, कहाँ पे

X एक ही प्रकार के पुष्टि किए गए जीवाणुओं की संख्या है;

a इस प्रकार की कॉलोनियों की कुल संख्या है;

- परीक्षण किए गए लोगों की संख्या;

c सकारात्मक परिणाम वाली कॉलोनियों की संख्या है।

प्रत्येक प्रकार की कॉलोनियों के लिए लेखांकन के परिणामों को सारांशित किया जाता है और फिर खंड 8.2.4.3-8.2.4.4 के अनुसार गणना की जाती है।

8.2.4.5. अंतिम परिणाम दिया गया है: 100 मिलीलीटर में सीएफयू टीसीबी की संख्या, जिसमें से 100 मिलीलीटर में सीएफयू टीसीबी की संख्या।

ग्राम-नेगेटिव ऑक्सीडेज-नेगेटिव बैक्टीरिया द्वारा गठित एंडो के माध्यम पर विशिष्ट कॉलीफॉर्म कॉलोनियों का पता लगाकर एक सांकेतिक परिणाम जारी किया जा सकता है। अंतिम उत्तर की पुष्टि लैक्टोज किण्वन के परिणामों से होती है।

8.2.4.6. ओकेबी और टीकेबी से संबंधित होने की पुष्टि के मामले में, सभी फिल्टर (खंड 8.2.3.5) पर कॉलोनियों या निरंतर वृद्धि को सुपरइम्पोज़ करते समय, एक गुणात्मक परिणाम "100 मिलीलीटर में ओकेबी का पता चला" जारी किया जाता है।

यदि फिल्टर पर सभी कॉलोनियां ऑक्सीडेज-पॉजिटिव हैं या ओकेबी और टीकेबी से संबंधित हैं, तो इसकी पुष्टि नहीं होती है, विश्लेषण पूरा हो गया है, प्रोटोकॉल कहता है "फिल्टर दफन"।

दोनों ही मामलों में, विश्लेषण दोहराया जाता है।

8.3. अनुमापन विधि द्वारा सामान्य और थर्मोटोलेथल कोलीफॉर्म बैक्टीरिया का निर्धारण

8.3.1. एक संकेतक की अवधारणा की परिभाषा

खंड 8.2.1 के अनुसार OKB और TKB संकेतकों की अवधारणा की परिभाषा।

8.3.2. आवेदन क्षेत्र

अनुमापन विधि का उपयोग किया जा सकता है:

झिल्ली निस्पंदन द्वारा विश्लेषण करने के लिए आवश्यक सामग्री और उपकरणों की अनुपस्थिति में;

निलंबित ठोस पदार्थों की उच्च सामग्री वाले पानी का विश्लेषण करते समय;

पानी में विदेशी माइक्रोफ्लोरा की प्रबलता के मामले में, जो फिल्टर पर सामान्य कोलीफॉर्म बैक्टीरिया की पृथक कॉलोनियों के उत्पादन को रोकता है।

8.3.3. विधि सिद्धांत

विधि एक तरल पोषक माध्यम में पानी की एक निश्चित मात्रा के टीकाकरण के बाद बैक्टीरिया के संचय पर आधारित है, इसके बाद लैक्टोज के साथ एक अंतर घने पोषक माध्यम पर उपसंस्कृति और सांस्कृतिक और जैव रासायनिक परीक्षणों द्वारा कॉलोनियों की पहचान पर आधारित है।

8.3.4. विश्लेषण करना

पीने के पानी के अध्ययन में गुणात्मक विधि(वर्तमान सैनिटरी और महामारी विज्ञान पर्यवेक्षण, उत्पादन नियंत्रण) 100 मिलीलीटर के 3 खंड टीका लगाते हैं।

उद्देश्य के लिए पानी का अध्ययन करते समय मात्रा का ठहराव OKB और TKB, जब पुन: विश्लेषण किया जाता है, टीका लगाया जाता है: 100 मिलीलीटर के 3 खंड, 10 मिलीलीटर के 3 खंड, 1 मिलीलीटर के 3 खंड।

परीक्षण पानी की प्रत्येक मात्रा को क्लॉज 5.5 के अनुसार तैयार किए गए लैक्टोज-पेप्टोन माध्यम में टीका लगाया जाता है। 100 मिलीलीटर और 10 मिलीलीटर पानी का टीकाकरण 10 और 1 मिलीलीटर केंद्रित लैक्टोज-पेप्टोन माध्यम में किया जाता है, नमूना के 1 मिलीलीटर का टीकाकरण सामान्य एकाग्रता के 10 मिलीलीटर माध्यम में किया जाता है।

फसलों को 48 घंटों के लिए (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है। 24 घंटों से पहले नहीं। ऊष्मायन, फसलों का प्रारंभिक मूल्यांकन किया जाता है। कंटेनरों से, जहां वृद्धि (गंदगी) की उपस्थिति और गैस के गठन का उल्लेख किया जाता है, पृथक कॉलोनियों को प्राप्त करने के लिए एंडो माध्यम (खंड 5.4.1) के क्षेत्रों में एक बैक्टीरियोलॉजिकल लूप को टीका लगाया जाता है।

वृद्धि और गैस गठन के बिना कंटेनरों को थर्मोस्टेट में छोड़ दिया जाता है और अंत में 48 घंटों के बाद जांच की जाती है। वृद्धि के संकेतों के बिना फसलों को नकारात्मक माना जाता है और वे आगे के शोध के अधीन नहीं हैं। कंटेनरों से जहां मैलापन और गैस का बनना या केवल मैलापन नोट किया जाता है, एंडो माध्यम के क्षेत्रों पर सीडिंग की जाती है।

एंडो माध्यम पर टीकाकरण (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर (18-20) घंटों के लिए इनक्यूबेट किया जाता है।

संचय माध्यम में मैलापन और गैस के निर्माण और लैक्टोज-पॉजिटिव बैक्टीरिया की विशिष्ट कॉलोनियों के एंडो माध्यम पर वृद्धि के साथ: गहरा लाल या लाल, धातु की चमक के साथ या बिना, लाल केंद्र के साथ उत्तल और पोषक तत्व पर एक छाप माध्यम, वे दिए गए नमूने की मात्रा में सामान्य कोलीफॉर्म बैक्टीरिया की उपस्थिति के लिए सकारात्मक प्रतिक्रिया देते हैं।

OKB की उपस्थिति की पुष्टि करना आवश्यक है:

यदि संचय माध्यम में केवल मैलापन देखा जाता है;

यदि लैक्टोज-पॉजिटिव कॉलोनियों से संबंधित है तो शोधकर्ता द्वारा संदेहास्पद है। ऐसे मामलों में:

एक संदिग्ध कॉलोनी को लूप करने के बाद एंडो के माध्यम पर एक छाप की जाँच करें;

8.2.3.2 खंड के अनुसार ऑक्सीडेज परीक्षण करें;

खंड 8.2.3.3 के अनुसार ग्राम से संबंधित होने की पुष्टि करें;

क्लॉज 5.6 के अनुसार लैक्टोज के साथ माध्यम पर प्रत्येक सेक्टर से प्रत्येक प्रकार की पृथक 1-2 कॉलोनियों के टीकाकरण द्वारा गैस निर्माण की क्षमता की पुष्टि की जाती है, इसके बाद (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर इनोक्यूलेशन का ऊष्मायन किया जाता है ( 24-48) घंटे।

पृथक कॉलोनियों की अनुपस्थिति में, एंडो माध्यम पर पारंपरिक बैक्टीरियोलॉजिकल विधियों द्वारा छानबीन की जाती है।

एक नकारात्मक उत्तर दिया जाता है यदि:

संचय वातावरण में वृद्धि के कोई संकेत नहीं हैं;

एंडो पर्यावरण के क्षेत्रों में कोई वृद्धि नहीं हुई है;

एंडो माध्यम के क्षेत्रों पर कॉलीफॉर्म बैक्टीरिया (दांतेदार किनारों, धुंधली, आदि के साथ पारदर्शी) की विशेषता नहीं कालोनियों में वृद्धि हुई;

सभी कॉलोनियां ऑक्सीडेज पॉजिटिव थीं;

सभी कॉलोनियां ग्राम-पॉजिटिव थीं;

यदि कार्बोहाइड्रेट के साथ माध्यम पर पुष्टिकरण परीक्षण में गैस गठन का उल्लेख नहीं किया गया है।

निर्धारण के लिए थर्मोटोलरेंट कोलीफॉर्म बैक्टीरियाएंडो माध्यम के क्षेत्रों के साथ काम करें जहां विशिष्ट लैक्टोज-पॉजिटिव कॉलोनियां विकसित हुई हैं। पैराग्राफ 5.6 के अनुसार तैयार किए गए किसी भी लैक्टोज मीडिया के साथ टेस्ट ट्यूब में प्रत्येक सेक्टर से प्रत्येक प्रकार की 2-3 अलग-अलग कॉलोनियों की बुवाई करें।

बुवाई से पहले, माध्यम को पानी के स्नान में या थर्मोस्टेट में 44 डिग्री सेल्सियस तक गरम किया जाता है। टीकाकरण के तुरंत बाद, ट्यूबों को थर्मोस्टैट में रखा जाता है और 24 घंटों के लिए (44 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर इनक्यूबेट किया जाता है। इसे (4-6) घंटों के बाद टीकाकरण देखने की अनुमति है।

संचय माध्यम में गैस बनने के साथ, एंडो माध्यम पर लैक्टोज-पॉजिटिव बैक्टीरिया की वृद्धि और इन बैक्टीरिया की क्षमता का पता लगाने के लिए 44 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 24 घंटे के लिए एसिड और गैस के लिए लैक्टोज को किण्वित करने के लिए, वे देते हैं इस खंड में एक नमूने की उपस्थिति का सकारात्मक जवाब टीकेबी पानी. अन्य सभी मामलों में, वे नकारात्मक उत्तर देते हैं।

संचय माध्यम की मात्रा से 1 मिलीलीटर टीका लगाने के लिए टीकेबी की उपस्थिति की प्रतिक्रिया जारी करने में तेजी लाने की अनुमति है, जहां एक फ्लोट के साथ एक लैक्टोज-पेप्टोन माध्यम के साथ एक टेस्ट ट्यूब में मैलापन और गैस गठन नोट किया जाता है खंड 5.6 और 44 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर प्रीहीट किया गया। फसलों को 24 घंटे के लिए (44 ± 0.5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर थर्मोस्टैट में रखा जाता है। यदि एसिड और गैस का पता चला है, तो वे सकारात्मक उत्तर देते हैं।

8.3.5. परिणामों के लिए लेखांकन

100 मिलीलीटर के 3 खंडों के अध्ययन में, परिणामों का गुणात्मक मूल्यांकन किया जाता है और यदि ओकेबी और टीकेबी को 3 खंडों में से कम से कम एक में पाया जाता है, तो "100 मिलीलीटर में पाया गया" प्रोटोकॉल में एक प्रविष्टि की जाती है।

मात्रात्मक विधि के अध्ययन में ओकेबी और टीकेबी की सबसे संभावित संख्या (एमपीएन) तालिका के अनुसार निर्धारित की जाती है। 1.1 आवेदन 1.

परिणाम विश्वास अंतराल के बिना रिपोर्ट किया जाता है।

सभी जांच किए गए संस्करणों में टीकेबी और टीकेबी की उपस्थिति के लिए नकारात्मक प्रतिक्रिया के मामले में, "100 मिलीलीटर में नहीं मिला" प्रोटोकॉल में एक निष्कर्ष जारी किया जाता है।

8.4. सल्फाइट को कम करने वाले क्लोस्ट्रीडिया के बीजाणुओं का निर्धारण

8.4.1. एक संकेतक की अवधारणा की परिभाषा

सल्फाइट को कम करने वाले क्लोस्ट्रीडिया बीजाणु बनाने वाले अवायवीय छड़ के आकार के सूक्ष्मजीव हैं जो (16-18) घंटों के लिए (44 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर आयरन-सल्फाइट अगर पर सोडियम सल्फाइट को कम करते हैं।

8.4.2. विधि सिद्धांत

यह विधि अवायवीय परिस्थितियों में आयरन सल्फाइट अगर में फसल उगाने और काली कॉलोनियों की संख्या की गणना पर आधारित है।

8.4.3. विश्लेषण करना

8.4.3.1. वानस्पतिक रूपों को बाहर करने के लिए पानी के 20 मिलीलीटर नमूने को टेस्ट ट्यूबों में (75 ± 5) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 15 मिनट के लिए पानी के स्नान में गर्म किया जाता है।

क्लोरीनयुक्त जल के अध्ययन में नमूने के तापन को छोड़ा जा सकता है।

पीने के पानी के प्रत्येक नमूने से, 20 मिलीलीटर सुसंस्कृत या फ़िल्टर किया जाता है। यदि आवश्यक हो, तो मात्रा का चयन करें ताकि फसलों में (फिल्टर पर) 10-15 से अधिक कॉलोनियां न उगें। इस मामले में, वे पिछले अध्ययनों के परिणामों द्वारा निर्देशित होते हैं।

जल निस्पंदन पैराग्राफ 7 में निर्धारित आवश्यकताओं के अनुसार किया जाता है।

8.4.3.2. परखनली में निस्यंदन द्वारा निर्धारण

टीकाकरण से पहले, 5.8 के अनुसार तैयार आयरन सल्फाइट अगर के साथ ट्यूबों को पानी के स्नान में पिघलाया जाता है (उबालें नहीं!) बुवाई के दौरान, माध्यम को पानी के स्नान में (70-80) डिग्री सेल्सियस तक गर्म रखा जाता है।

पानी की निर्धारित मात्रा को छानने के बाद, झिल्ली फिल्टर को दो विपरीत किनारों से फ्लेमेड चिमटी के साथ लिया जाता है और ट्यूब के रूप में मुड़ा हुआ गर्म अगर के साथ एक टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है। बसे हुए बैक्टीरिया के साथ फिल्टर का किनारा अंदर की ओर है। इस मामले में, फिल्टर को सीधा किया जाता है और टेस्ट ट्यूब की दीवार के साथ स्थित होता है।

टीकाकरण के तुरंत बाद, अगर के साथ ट्यूब और अवायवीय स्थिति बनाने के लिए एक फिल्टर के साथ एक कंटेनर में रखकर तेजी से ठंडा किया जाता है ठंडा पानी. (16-18) घंटों के लिए (44 ± आई) डिग्री सेल्सियस पर फसलों की खेती करें।

8.4.3.3. पेट्री डिश में निस्पंदन द्वारा निर्धारण

(55-60) मिमी व्यास वाले पेट्री डिश आयरन-सल्फाइट अगर की एक पतली परत से भरे होते हैं। छानने के बाद, फिल्टर सतह के साथ फिल्टर को ठोस पोषक माध्यम पर नीचे रखें ताकि फिल्टर के नीचे हवा के बुलबुले न हों। फिर पिघले हुए आयरन सल्फाइट अगर को डिश के ऊपर तक डालें ताकि ढक्कन अवायवीय स्थिति बनाने के लिए माध्यम पर अच्छी तरह से फिट हो जाए। (16 - 1 8) घंटों के लिए (44 ± 1) डिग्री सेल्सियस पर फसलों की खेती करें।

8.4.3.4. सीधी बुवाई द्वारा निर्धारण

आयरन सल्फाइट अगर शीशियों और पानी के नमूने 8.4.3.1 में वर्णित अनुसार तैयार किए जाते हैं ।

बाँझ टेस्ट ट्यूब में जोड़ें:

2 परखनलियों में 10 मिली (मात्रा में कम से कम 30 मिली) या

4 परखनलियों में 5 मिली (प्रत्येक में 15 मिली)।

पानी की मात्रा से 2 गुना अधिक मात्रा में गर्म आयरन-सल्फाइट अगर के साथ फसलें डाली जाती हैं। हवा के बुलबुले के गठन से बचने के लिए, टेस्ट ट्यूब की दीवार के साथ माध्यम डालें। उसके बाद, अवायवीय स्थिति बनाने के लिए ट्यूब को ठंडे पानी के कंटेनर में रखकर तेजी से ठंडा किया जाता है। टीकाकरण (44 ± 1) डिग्री सेल्सियस (16-18) घंटों के लिए इनक्यूबेट किया जाता है।

8.4.4. परिणामों के लिए लेखांकन

केवल वे फसलें जहां पृथक कॉलोनियां प्राप्त होती हैं, मात्रात्मक लेखांकन के अधीन हैं। काली कालोनियों की गणना की जाती है, दोनों फिल्टर पर और पोषक माध्यम की मोटाई में उगाई जाती हैं।

विश्लेषण का परिणाम 20 मिलीलीटर पानी में सल्फाइट-कम करने वाले क्लॉस्ट्रिडिया के बीजाणुओं की कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सीएफयू) की संख्या के रूप में व्यक्त किया जाता है।

यदि सभी फिल्टरों पर काली कॉलोनियों की वृद्धि नहीं होती है, तो उत्तर "20 मिली पानी में नहीं पाया जाता है"।

यदि संगम वृद्धि के कारण कालोनियों की गणना करना असंभव है, तो परिणाम का मूल्यांकन गुणात्मक के रूप में किया जाता है, प्रोटोकॉल नोट "20 मिली में पाया जाता है"। यदि आवश्यक हो, तो मात्रात्मक परिणाम प्राप्त करने के लिए, विश्लेषण दोहराया जाता है।

8.5. कोलिफेज की परिभाषा

8.5.1. एक संकेतक की अवधारणा की परिभाषा

कोलीफेज जीवाणु विषाणु होते हैं जो ई. कोलाई को नष्ट करने में सक्षम होते हैं और पोषक तत्व अगर पर (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर (18 ± 2) एच बैक्टीरियल लॉन लाइसिस जोन (सजीले टुकड़े) बनते हैं।

8.5.2. कोलिफेज के निर्धारण के लिए अनुमापन विधि

8.5.2.1. विधि सिद्धांत

पीने के पानी में कोलीफेज का निर्धारण ई. कोलाई की संस्कृति पर संवर्धन माध्यम में कोलिफेज के प्रारंभिक संचय और पोषक तत्व अगर पर ई. कोलाई लॉन के लिसिस (ज्ञानोदय) के क्षेत्रों की बाद की पहचान में होता है।

8.5.2.2. आवेदन क्षेत्र

विधि बाहर ले जाने के लिए अभिप्रेत है वर्तमान नियंत्रणपीने के पानी की गुणवत्ता।

8.5.2.3. परीक्षण संस्कृति ई. कोलाई K12 StrR की तैयारी।

अध्ययन के सभी चरणों में, निम्नानुसार तैयार एक जीवाणु निलंबन का उपयोग किया जाता है: ई. कोलाई की संस्कृति को स्ट्रेप्टोमाइसिन (धारा 5.3.5) के साथ झुके हुए पोषक तत्व अगर के साथ एक परखनली में टीका लगाया जाता है। (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ऊष्मायन के (18 ± 2) घंटे के बाद, संयुक्त से बैक्टीरिया को 5 मिलीलीटर बाँझ खारा (0.85% NaCl समाधान) से धोएं और, मैलापन मानक के अनुसार, एक निलंबन तैयार करें ई. कोलाई का 1 मिली में 109 जीवाणु कोशिकाओं की सांद्रता पर।

थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर बढ़ने से प्राप्त ई. कोलाई की 4 घंटे की शोरबा संस्कृति का उपयोग करने की अनुमति है। 109 ई. कोलाई जीवाणु कोशिकाओं की सांद्रता 2 मिली में निहित है।

8.5.2.4। गुणात्मक विश्लेषण करना

परीक्षण पानी में 10 गुना पोषक तत्व शोरबा (खंड 5.2.2 के अनुसार तैयार) के 10 मिलीलीटर और परीक्षण संस्कृति के तैयार धोने के 1 मिलीलीटर या 4 घंटे के शोरबा संस्कृति के 2 मिलीलीटर (खंड 8.5.2.3) जोड़ें। 100 मिलीलीटर की मात्रा के साथ नमूना।

कल्चर नियंत्रण के लिए, ई. कोलाई वॉश का 0.1 मिली (या 4 घंटे के ब्रोथ कल्चर का 0.2 मिली) पेट्री डिश में रखा जाता है और पोषक तत्व अगर से ढक दिया जाता है।

परीक्षण पानी का नमूना (100 मिली) और ई. कोलाई नियंत्रण वाली पेट्री डिश को थर्मोस्टेट में रखा जाता है और (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर (18 ± 2) घंटों के लिए इनक्यूबेट किया जाता है।

ऊष्मायन के बाद, परीक्षण पानी के नमूने का 10 मिलीलीटर एक परखनली में डाला जाता है और 1 मिलीलीटर क्लोरोफॉर्म मिलाया जाता है।

टेस्ट ट्यूब को एक बाँझ रबर या सिलिकॉन स्टॉपर के साथ बंद कर दिया जाता है, नमूना मात्रा पर क्लोरोफॉर्म को समान रूप से वितरित करने के लिए सख्ती से हिलाया जाता है, और कमरे के तापमान पर कम से कम 15 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है जब तक कि क्लोरोफॉर्म पूरी तरह से अवक्षेपित न हो जाए।

प्री-मेल्टेड और कूल्ड (45-49) डिग्री सेल्सियस पोषक तत्व अगर में, ई. कोलाई बैक्टीरिया (क्लॉज 8.5.2.3) के तैयार वॉशआउट को 1.0 मिली वॉशआउट (या 4 घंटे के शोरबा के 2 मिली) की दर से मिलाएं। संस्कृति) प्रति 100 मिलीलीटर अगर।

एक परखनली से पिपेट के साथ एक बाँझ पेट्री डिश में क्लोरोफॉर्म (क्लोरोफॉर्म को छुए बिना) के साथ इलाज किए गए नमूने के 1 मिलीलीटर को स्थानांतरित करें और इसे पिघले हुए मिश्रण के साथ भरें और (45-49) डिग्री सेल्सियस पोषक तत्व अगर की मात्रा के साथ ठंडा करें (12-15) मिली, साथ ही ई. कोलाई कल्चर को नियंत्रित करने के लिए एक अतिरिक्त पेट्रीड डिश और पानी और अगर के नमूनों को समान रूप से मिलाने के लिए धीरे से हिलाएं। पूरी तरह से जमने के लिए, कपों को टेबल पर कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है। जमने के बाद, कपों को पलट दिया जाता है और 37 डिग्री सेल्सियस पर (18 ± 2) घंटे के लिए थर्मोस्टैट में रखा जाता है।

नमूनों की एक श्रृंखला करते समय, पूरी श्रृंखला के लिए एक सामान्य नियंत्रण रखा जाता है।

परिणामों के लिए लेखांकन

संचरित प्रकाश में की गई फसलों को देखें।

नियंत्रण प्लेट पर लसीका क्षेत्रों की अनुपस्थिति में पानी के नमूने के साथ प्लेट पर एक पट्टिका, कई पट्टिकाओं को साफ करने, पूर्ण लसीका की उपस्थिति में नमूना सकारात्मक माना जाता है।

विश्लेषण प्रोटोकॉल नोट: 100 मिलीलीटर पानी (गुणात्मक परिणाम) में कोलिफेज पाए गए या नहीं पाए गए।

यदि संस्कृति नियंत्रण में लसीका क्षेत्र हैं, तो परिणाम को अमान्य माना जाता है।

8.5.2.5. मात्रात्मक विश्लेषण करना

जांचे गए पानी के नमूने को 100 मिली की मात्रा में 6 मात्रा में डालें: 50 मिली की 1 बोतल और 10 मिली की 5 टेस्ट ट्यूब। नमूने के 50 मिलीलीटर में, ई. कोलाई बैक्टीरिया (खंड 8.5.2.3) के 5 मिलीलीटर दस गुना पोषक तत्व शोरबा (5.2.2 के अनुसार) और 0.5 मिलीलीटर वाश (या 4 घंटे के शोरबा संस्कृति का 1 मिलीलीटर) मिलाएं। . नमूने के प्रत्येक 10 मिलीलीटर में, ई. कोलाई बैक्टीरिया का 1 मिलीलीटर दस गुना पोषक तत्व शोरबा और 0.1 मिलीलीटर वाश (या 4-घंटे शोरबा संस्कृति का 0.2 मिलीलीटर) मिलाएं।

कल्चर कंट्रोल के लिए, ई. कोलाई के ओडी एमएल बैक्टीरिया वॉश (या 4-घंटे ब्रोथ कल्चर का 0.2 मिली) को पेट्री डिश में रखा जाता है और पोषक तत्व अगर से भर दिया जाता है।

फसलों को (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 18 ± 2 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया जाता है।

ऊष्मायन के बाद, एक परखनली में 50 मिलीलीटर की मात्रा से 10 मिलीलीटर डालें। सभी 6 परीक्षण मात्राओं में 1 मिली क्लोरोफॉर्म मिलाएं। बाँझ रबर या सिलिकॉन स्टॉपर्स के साथ टेस्ट ट्यूब को बंद करें, नमूना मात्रा पर क्लोरोफॉर्म को समान रूप से वितरित करने के लिए सख्ती से हिलाएं, और क्लोरोफॉर्म को कम करने के लिए कम से कम 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर छोड़ दें।

पहले पिघला हुआ और ठंडा (45-49) डिग्री सेल्सियस पोषक तत्व अगर में, ई. कोलाई बैक्टीरिया (खंड 8.5.2.3) की तैयार धुलाई को 1.0 मिली धुलाई (या 4 घंटे के शोरबा के 2 मिली) की दर से मिलाएं। संस्कृति) प्रति 100 मिलीलीटर अगर। तैयार मिश्रण को पेट्री डिश में डालें: 1 कप लाइसोजेनिसिटी के लिए ई. कोलाई की संस्कृति को नियंत्रित करने के लिए और अध्ययन के तहत प्रत्येक पानी के नमूने के लिए एक कप। कई पानी के नमूनों के एक साथ विश्लेषण के साथ, ई कोलाई संस्कृति का एक नियंत्रण रखा गया है।

अगर के जमने के बाद, नमूनों के टीकाकरण के लिए अभिप्रेत व्यंजन को 6 क्षेत्रों में विभाजित किया जाता है, जिन्हें अध्ययन के तहत मात्रा के अनुसार लेबल किया जाता है। पाश्चर पिपेट (एक अनुदैर्ध्य स्ट्रोक के साथ माइक्रोपिपेट या बैक्टीरियोलॉजिकल लूप) के साथ, संबंधित टेस्ट ट्यूब से प्रत्येक सेक्टर में सतह पर तैरनेवाला तरल (क्लोरोफॉर्म के बिना) की 1 बूंद लागू करें।

बूंदों के सूख जाने के बाद, परीक्षण नमूनों के साथ कप और नियंत्रण कप को थर्मोस्टैट में (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस पर (18 ± 2) घंटों के लिए रखें।

परिणामों के लिए लेखांकन

परिणाम संचरित प्रकाश में देखे जाते हैं।

ई। कोलाई लॉन के क्षेत्रों पर ज्ञानोदय (लिसिस) के क्षेत्रों की उपस्थिति से लेखांकन किया जाता है।

एक पिपेट के साथ ड्रिप सीडिंग विधि का उपयोग करते समय, एक गोल स्थान या व्यक्तिगत सजीले टुकड़े के रूप में एक लसीका क्षेत्र बनता है। बैक्टीरियोलॉजिकल लूप के साथ एक अनुदैर्ध्य स्ट्रोक की बुवाई करते समय, स्ट्रोक के साथ लसीका का उल्लेख किया जाता है।

नमूना सकारात्मक माना जाता है यदि नियंत्रण प्लेट पर lysis ज़ोन की अनुपस्थिति में कम से कम एक सेक्टर पर एक lysis ज़ोन है।

मूल्यांकन पट्टिका बनाने वाली इकाइयों (पीएफयू) (तालिका 1.2) की सबसे संभावित संख्या (एमपीएन) की तालिका के अनुसार किया जाता है। विश्लेषण प्रोटोकॉल 100 मिलीलीटर पानी में कोलिफेज की सबसे संभावित संख्या और संभावित उतार-चढ़ाव की सीमा को इंगित करता है: 100 मिलीलीटर में कोलिफेज की एलएफ पीएफयू (निचली सीमा - ऊपरी सीमा)। परिणाम अर्ध-मात्रात्मक है।

यदि नियंत्रण डिश में लसीका के क्षेत्र हैं, तो परिणाम को अमान्य माना जाता है।

8.5.3. कोलिफेज निर्धारित करने की सीधी विधि

।एक। विधि सिद्धांत

पीने के पानी में कोलीफेज के निर्धारण में पोषक तत्व अगर के साथ पेट्री डिश में ई. कोलाई लॉन पर प्रत्यक्ष टीकाकरण और बाद में लसीका क्षेत्रों (सजीले टुकड़े) के पंजीकरण द्वारा पानी की एक सामान्यीकृत मात्रा (100 मिलीलीटर) का अध्ययन शामिल है।

8.5.3.2. कार्यक्षेत्र

कोलिफेज को पानी से अलग करने की सीधी विधि महामारी के संकेतों के अनुसार अध्ययनों में अनुमापन विधि के समानांतर की जाती है।

8.5.3.3. विश्लेषण का संचालन

डबल सांद्रण (p. 5.3.2) के पोषक तत्व अगर में, पिघलाकर (45-49) ° C तक ठंडा किया जाता है, तो 2.0 ml वॉश (या 4 ml) की दर से E. कोलाई वॉश (p. 8.5.2.3) मिलाएं। 4 घंटे की शोरबा संस्कृति) प्रत्येक 100 मिलीलीटर अगर के लिए, मिश्रण। जांचे गए 100 मिली पानी को 20 मिली बड़ी परखनलियों में डालें, (35-44) डिग्री सेल्सियस तक गरम करें और तुरंत (आवश्यक तापमान तक पहुँचने के 5 मिनट से अधिक नहीं) 5 पेट्री डिश में डालें और तुरंत प्रत्येक डिश में 20 मिली डालें। ई. कोलाई कल्चर के साथ अगर मिश्रण।

ई. कोलाई के कल्चर को नियंत्रित करने के लिए, एक पेट्री डिश में (35-44) डिग्री सेल्सियस पर पहले से गरम 20 मिलीलीटर बाँझ नल का पानी डालें, ई. कोलाई के साथ तैयार अगर के 20 मिलीलीटर डालें और धीरे से मिलाएं।

कप की सामग्री को धीरे से हिलाएं और कमरे के तापमान पर जमने तक छोड़ दें। जमे हुए अगर के साथ प्लेटों को थर्मोस्टेट में उल्टा रखें और (37 ± 1) डिग्री सेल्सियस के तापमान पर (18 ± 2) घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।

परिणामों के लिए लेखांकन

फसलों को देखने का कार्य संचरित प्रकाश में किया जाता है।

परिणामों के लिए लेखांकन 5 पेट्री डिश पर उगाई गई पट्टिकाओं की गिनती और योग करके किया जाता है। परिणाम प्रति 100 मिलीलीटर पानी के नमूने में पट्टिका बनाने वाली इकाइयों (पीएफयू) में व्यक्त किए जाते हैं। नियंत्रण डिश में कोई पट्टिका नहीं होनी चाहिए।

सबसे अधिक बार, स्पष्ट रूप से परिभाषित या मिटाए गए सीमाओं के साथ गोल पृथक सजीले टुकड़े (1 से 5-7) मिमी व्यास के रूप में पोषक तत्व अगर परीक्षण संस्कृति लॉन की पृष्ठभूमि के खिलाफ पारदर्शी धब्बे की तरह दिखते हैं।

उच्च फेज सांद्रता पर, अलग तस्वीरविश्लेषण

नकारात्मक कॉलोनियों का संलयन ई. कोलाई का "ओपनवर्क" लॉन देता है, निरंतर लसीका की पृष्ठभूमि के खिलाफ ई. कोलाई की एकल कॉलोनियों का विकास, या डिश पर विकास की पूर्ण कमी।

प्रत्यक्ष टीकाकरण के साथ, लसीका संभव है, अमानवीय रूप से ठोस अगर द्वारा मुखौटा किया जाता है, साथ ही साथ माइक्रोफ्लोरा द्वारा बंद किया जाता है। सीधे टीकाकरण से घनीभूत और अमानवीय रूप से सेट अगर की बूंदों से ई कोलाई लॉन में कलाकृतियों का निर्माण हो सकता है जो नेत्रहीन रूप से लसीका जैसा दिखता है।

ऊष्मायन के (5-6) घंटों के बाद परिणामों का प्रारंभिक लेखा-जोखा किया जा सकता है। इस स्तर पर, लसीका के स्पष्ट क्षेत्रों की उपस्थिति में, पानी में कोलिफेज की उपस्थिति के बारे में प्रारंभिक उत्तर जारी किया जा सकता है।

प्रत्यक्ष टीकाकरण का अंतिम मात्रात्मक रिकॉर्ड (18 ± 2) घंटों के बाद किया जाता है। परिणाम प्रति 100 मिलीलीटर पानी के नमूने में पट्टिका बनाने वाली इकाइयों (पीएफयू) की संख्या के रूप में व्यक्त किए जाते हैं।

यदि मिला हुआ पट्टिका विकास नोट किया जाता है और गिनती मुश्किल होती है, तो प्रत्यक्ष बोने के अनुसार एक गुणात्मक परिणाम जारी किया जा सकता है: "100 मिलीलीटर पानी में पाया जाता है"।

यदि प्रत्यक्ष विधि के साथ काम करने पर नकारात्मक परिणाम प्राप्त होता है, तो अंतिम उत्तर अनुमापन विधि के परिणामों के अनुसार जारी किया जाता है।

यदि नियंत्रण डिश में लसीका के क्षेत्र हैं, तो अध्ययन के परिणाम को अमान्य माना जाता है।

8.5.4. नियंत्रण स्थापित करना

8.5.4.1. नकारात्मक नियंत्रण

नकारात्मक नियंत्रण तैयारी और विश्लेषण के चरणों में पोषक तत्व मीडिया, प्रयोगशाला कांच के बने पदार्थ, उपकरण के फेज संदूषण की अनुपस्थिति की पुष्टि करता है, और आपको परीक्षण संस्कृति ई की क्षमता का मूल्यांकन करने की भी अनुमति देता है। कोलाई एक समान लॉन देने के लिए।

नकारात्मक नियंत्रण बाँझ नल के पानी का अध्ययन है, जो विश्लेषण किए गए पानी के नमूने के समान किया जाता है। इसलिए, अनुमापन विधि द्वारा पानी का विश्लेषण करते समय, एक अतिरिक्त टेस्ट ट्यूब में 10 मिलीलीटर बाँझ नल का पानी मिलाया जाता है। प्रत्यक्ष टीकाकरण द्वारा पानी का विश्लेषण करते समय, अतिरिक्त छठे पेट्री डिश में 20 मिलीलीटर बाँझ नल का पानी मिलाया जाता है।

मुख्य नमूनों की तरह ही कोलिफेज के लिए अतिरिक्त फसलों की जांच की जाती है।

नमूनों की एक श्रृंखला का विश्लेषण करते समय, प्रत्येक प्रकार के विश्लेषण के लिए एक नकारात्मक नियंत्रण हो सकता है: अनुमापन और प्रत्यक्ष। इस मामले में, इस श्रृंखला के सभी नमूनों को संसाधित करने के बाद नकारात्मक नियंत्रण का मंचन किया जाता है।

यदि नकारात्मक नियंत्रण प्लेटों में कोलिफेज की पट्टिकाएँ पाई जाती हैं, तो पानी के नमूनों की पूरी श्रृंखला के अध्ययन के परिणाम अमान्य हैं।

प्रयोगशाला के उपकरण, बर्तन, कल्चर मीडिया की बाँझपन की जाँच करना और ई. कोलाई K12 F + StrR टेस्ट स्ट्रेन की शुद्धता के लिए नियंत्रण टीकाकरण को दोहराना आवश्यक है।

नकारात्मक नियंत्रण की आवृत्ति - प्रति दिन 1 बार।

8.5.4.2. लसीका की फेज प्रकृति की पुष्टि करने की विधि

संदिग्ध मामलों में, अनुमापन और प्रत्यक्ष दोनों तरीकों के साथ काम करते समय, लसीका की फेज प्रकृति की पुष्टि करने के लिए एक नियंत्रण टीकाकरण करना आवश्यक है।

इस प्रयोजन के लिए, एक बैक्टीरियोलॉजिकल लूप का उपयोग अगर के एक खंड को हटाने के लिए किया जाता है, जो कि कोलिफेज के लिए संदिग्ध है, इसे 5 मिलीलीटर पोषक तत्व शोरबा में रखें, जहां ई। कोलाई परीक्षण संस्कृति की एक बूंद डाली जाती है और 37 डिग्री सेल्सियस (16) के लिए ऊष्मायन किया जाता है। -18) घंटे। परिणामी संस्कृति को क्लोरोफॉर्म के साथ इलाज किया जाता है और फेज की उपस्थिति के लिए जांच की जाती है। पोषक तत्व अगर क्षेत्रों पर लूप या पिपेट के साथ सीडिंग उसी तरह से की जाती है जैसे पैराग्राफ 8.5.2.5 में वर्णित है। किसी भी क्षेत्र पर विश्लेषण को फेज की उपस्थिति की पुष्टि के रूप में माना जाता है।

जल विश्लेषण की इस पद्धति के साथ, लगभग 0.45 माइक्रोन के छिद्र आकार के साथ एक विशेष झिल्ली के माध्यम से पानी की एक निश्चित मात्रा को पारित किया जाता है। नतीजतन, पानी में मौजूद सभी बैक्टीरिया झिल्ली की सतह पर बने रहते हैं। उसके बाद, बैक्टीरिया के साथ झिल्ली को एक विशेष पोषक माध्यम में 30-37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक निश्चित समय के लिए रखा जाता है। इस अवधि के दौरान, जिसे ऊष्मायन अवधि कहा जाता है, बैक्टीरिया को गुणा करने और अच्छी तरह से परिभाषित कॉलोनियों को बनाने का अवसर मिलता है जिन्हें गिनना आसान होता है। परिणामस्वरूप, आप इसे देख सकते हैं: या यह चित्र भी: चूंकि जल विश्लेषण की इस पद्धति में केवल कॉलोनियों की कुल संख्या का निर्धारण करना शामिल है - बैक्टीरिया बनाने वाले अलग - अलग प्रकार, तो इसके परिणामों से पानी में रोगजनक रोगाणुओं की उपस्थिति का असमान रूप से न्याय करना असंभव है। हालांकि, उच्च माइक्रोबियल गिनतीपानी के सामान्य बैक्टीरियोलॉजिकल संदूषण और रोगजनक जीवों की उपस्थिति की उच्च संभावना को इंगित करता है।

पानी का विश्लेषण करते समय, न केवल विषाक्त पदार्थों की सामग्री को नियंत्रित करना आवश्यक है रासायनिक पदार्थ, लेकिन पीने के पानी के बैक्टीरियोलॉजिकल संदूषण की विशेषता वाले सूक्ष्मजीवों की संख्या, टीएमएफ कुल माइक्रोबियल संख्या है। केंद्रीकृत जल आपूर्ति के पानी में, यह संख्या 50 सीएफयू / एमएल से अधिक नहीं होनी चाहिए, और कुओं, कुओं में - 100 से अधिक नहीं सीएफयू / एमएल

पानी का स्वच्छता और सूक्ष्मजीवविज्ञानी अनुसंधान एक योजनाबद्ध तरीके से किया जाता है
वर्तमान निगरानी के उद्देश्य के साथ-साथ विशेष महामारी विज्ञान के लिए आदेश
किम गवाही। इस तरह के शोध के मुख्य उद्देश्य हैं:

- केंद्रीय जल आपूर्ति (नल का पानी) का पेयजल;

- गैर-केंद्रीकृत जल आपूर्ति का पेयजल;

- सतही और भूमिगत जल स्रोतों से पानी;

- अपशिष्ट जल;

- समुद्र के तटीय क्षेत्रों का पानी;

- स्विमिंग पूल का पानी।

वर्तमान नियामक दस्तावेजों के अनुसार पीने के पानी की सूक्ष्मजीवविज्ञानी स्थिति का आकलन करने के लिए मुख्य संकेतक हैं:

1. टोटल माइक्रोबियल काउंट (TMC) - 1 मिली पानी में मेसोफिलिक बैक्टीरिया की संख्या।

अगर अनुमापांक- पानी की सबसे छोटी मात्रा (मिलीलीटर में) जिसमें कम से कम एक जीवित हो
बीजीकेपी से संबंधित माइक्रोबियल सेल।
बीजीकेपी सूचकांक- 1 लीटर पानी में बीजीकेपी की मात्रा।

3. 20 मिली पानी में सल्फाइट कम करने वाले क्लोस्ट्रीडिया के बीजाणुओं की संख्या।

4. 100 मिली पानी में कोलिफेज की संख्या।

टीएमसी का निर्धारण पीने के पानी के सूक्ष्मजीवविज्ञानी संदूषण के स्तर का आकलन करना संभव बनाता है। बड़े पैमाने पर माइक्रोबियल संदूषण का तत्काल पता लगाने के लिए यह संकेतक अपरिहार्य है।

कुल माइक्रोबियल गिनती- यह मेसोफिलिक एरोबिक और फैकल्टी एनारोबिक सूक्ष्मजीवों की संख्या है जो 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पोषक तत्व अगर पर कॉलोनियां बनाने में सक्षम हैं और 24 घंटों के भीतर, दो गुना वृद्धि पर दिखाई देते हैं।

कुल माइक्रोबियल संख्या का निर्धारण करते समय, परीक्षण पानी का 1 मिलीलीटर एक बाँझ पेट्री डिश में जोड़ा जाता है और 10-12 मिलीलीटर गर्म (44 डिग्री सेल्सियस) पिघला हुआ पोषक तत्व अगर डाला जाता है। माध्यम धीरे-धीरे पानी के साथ मिश्रित होता है, समान रूप से और
बिना हवा के बुलबुले कप के नीचे वितरित करें, फिर ढक्कन के साथ कवर करें और जमने के लिए छोड़ दें। फसलों को 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टैट में इनक्यूबेट किया जाता है। दोनों व्यंजनों में उगाई गई कॉलोनियों की कुल संख्या की गणना करें और औसत मूल्य निर्धारित करें। अंतिम परिणाम परीक्षण पानी के 1 मिलीलीटर में कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सीएफयू) की संख्या के रूप में व्यक्त किया जाता है। 1 मिली पीने के पानी में 50 CFU से अधिक नहीं होना चाहिए

बीजीकेपी की परिभाषा
इसी समय, सामान्य कॉलीफॉर्म बैक्टीरिया - ओकेबी और थर्मोटोलरेंट कोलीफॉर्म बैक्टीरिया - टीकेबी निर्धारित किए जाते हैं।

जीकेबी ग्राम-नकारात्मक, गैर-बीजाणु बनाने वाली छड़ें हैं जो 24-48 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एसिड और गैस के लिए लैक्टोज को किण्वित करती हैं। टीकेबी ओकेबी में से हैं, उनके पास उनके संकेत हैं, लेकिन मैं 44 डिग्री सेल्सियस पर किण्वन करता हूं। एंटरोबैक्टीरिया के निर्धारण के लिए - झिल्ली फिल्टर या अनुमापन की विधि।

माइक्रोबियल संख्या - पेयजल की सूक्ष्मजीवविज्ञानी स्थिति का आकलन करने के लिए मुख्य मानदंड,मौजूदा के आधार पर नियामक दस्तावेज, टीएमसी (कुल माइक्रोबियल संख्या) है, जो एक पोषक माध्यम में 37 डिग्री के तापमान पर प्रति दिन बनने वाले एक मिलीलीटर पानी में एरोबिक और एनारोबिक बैक्टीरिया की संख्या को दर्शाता है।

जल आपूर्ति प्रणालियों के पेयजल के गुणवत्ता संकेतक।

बड़े पैमाने पर माइक्रोबियल संदूषण का तेजी से पता लगाने के लिए यह संकेतक वस्तुतः अपरिहार्य है।

के लिये कुल माइक्रोबियल संख्या का निर्धारणपरीक्षण पानी का एक मिलीलीटर एक बाँझ पेट्री डिश में जोड़ा जाता है, फिर 10-15 मिलीलीटर गर्म (लगभग 44 डिग्री सेल्सियस) पोषक तत्व अगर पिघला हुआ रूप में डाला जाता है। माध्यम को सावधानी से पानी के साथ मिलाया जाता है, समान रूप से वितरित किया जाता है और डिश के तल पर हवा के बुलबुले के बिना, फिर ढक्कन के साथ बंद कर दिया जाता है और पेट्री डिश में जमने तक छोड़ दिया जाता है। दूसरे कप में भी ऐसा ही किया जाता है। थर्मोस्टेट में बुवाई दिन के दौरान 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर की जाती है। फिर, एक माइक्रोस्कोप के तहत डबल आवर्धन पर, दो कप में उगाई गई कॉलोनियों की कुल संख्या की गणना की जाती है, और औसत मूल्य निर्धारित किया जाता है। 1 मिली पीने के पानी में 50 CFU से अधिक नहीं होना चाहिए।

(मुख्य विधि)

विधि झिल्ली फिल्टर के माध्यम से पानी की एक निश्चित मात्रा (300 मिली) को छानने पर आधारित है, लैक्टोज (एंडो) के साथ एक विभेदक निदान माध्यम पर फसल उगाना और सांस्कृतिक और जैव रासायनिक विशेषताओं द्वारा उपनिवेशों की पहचान करना।

विश्लेषण के लिए तैयार किए गए मेम्ब्रेन फिल्टर (उबले या किसी अन्य तरीके से निष्फल) को फिल्टर उपकरण के कीप में बाँझ चिमटी के साथ रखा जाता है। डिवाइस के फ़नल में पानी की एक मापी गई मात्रा डाली जाती है और एक वैक्यूम बनाया जाता है। छानने के बाद, फिल्टर को हटा दिया जाता है और एंडो पोषक माध्यम की सतह पर बिना पलटे रख दिया जाता है।

एक कप में 3 फिल्टर फिट हो सकते हैं। पीने के पानी के अध्ययन में, 100 मिलीलीटर की 3 मात्रा को फ़िल्टर किया जाता है। अज्ञात गुणवत्ता के पानी का विश्लेषण करते समय, फिल्टर (10.40, 100 और 150 मिलीलीटर) पर पृथक कॉलोनियों को प्राप्त करने के लिए पानी की अन्य मात्रा को फ़िल्टर करने की सलाह दी जाती है।

फिल्टर डिश 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक इनक्यूबेटर में उल्टा इनक्यूबेट किया जाता है।

यदि फिल्टर पर कोई वृद्धि नहीं हुई है या असामान्य झिल्लीदार, फफूंदी, धुंधली कॉलोनियां बढ़ी हैं, तो वे एक नकारात्मक परिणाम देते हैं। अध्ययन किए गए पानी के 100 मिलीलीटर में ओकेबी और टीकेबी अनुपस्थित हैं।

फिल्टर पर विशिष्ट पृथक लैक्टोज-पॉजिटिव (फिल्टर के रिवर्स साइड पर प्रिंट के साथ गहरे लाल) कॉलोनियों की वृद्धि के साथ, उनकी संख्या की गणना की जाती है और वे ओकेबी और टीकेबी से संबंधित होने की पुष्टि करना शुरू करते हैं।

3-4 ग्राम-दाग वाली कॉलोनियों से स्मीयरों की सूक्ष्म जांच की जाती है (ग्राम-नकारात्मक को ध्यान में रखा जाता है);

ऑक्सीडेज की उपस्थिति निर्धारित की जाती है (ऑक्सीडेज-नेगेटिव को ध्यान में रखा जाता है, क्योंकि ऑक्सीडेज-पॉजिटिव ग्राम-नेगेटिव रॉड्स एंटरोबैक्टीरिया से संबंधित नहीं होते हैं, लेकिन उदाहरण के लिए, स्यूडोमोनैड्स हो सकते हैं);

एसिड और गैस के लिए लैक्टोज का किण्वन 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर निर्धारित किया जाता है, जो कि थोड़ी रंगीन कॉलोनियों और टीकेबी से उनके संबंध के लिए महत्वपूर्ण है, और 44 ± 0.5 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर, यह तय करने के लिए कि वे संबंधित हैं या नहीं टीकेबी.

ऑक्सीडेज परीक्षण की स्थापना

कागज पर α-नैफ्थोल के 1% अल्कोहल घोल और डाइमिथाइलफेनिलेनेडियम के 1% जलीय घोल से सिक्त, रंगीन कॉलोनी के एक हिस्से को प्लैटिनम लूप या ग्लास रॉड के साथ लगाया जाता है। प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है यदि 1 मिनट के भीतर, अधिकतम 4 मिनट, एक नीला या बैंगनी रंग दिखाई देता है। ऑक्सीडेज-पॉजिटिव कॉलोनियों को ध्यान में नहीं रखा जाता है और आगे के शोध के अधीन नहीं हैं।

कालोनियों के साथ फिल्टर को अभिकर्मक के साथ सिक्त कागज में स्थानांतरित करना संभव है। आप आसुत जल से सिक्त रेडीमेड पेपर सिस्टम (एनआईबी) का उपयोग कर सकते हैं।

ग्राम-नेगेटिव ऑक्सीडेज-नेगेटिव बैक्टीरिया के कुछ कॉलोनियों का परीक्षण लैक्टोज को किण्वित करने की क्षमता के लिए किया जाता है। यह लैक्टोज के साथ एक अर्ध-तरल माध्यम और एक पीएच संकेतक का उपयोग करता है। 2 परखनलियों में नीचे तक इंजेक्शन लगाकर बुवाई की जाती है। एक को टीकेबी से संबंध की पुष्टि करने के लिए 24-48 घंटों के लिए 37 ± 1 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ऊष्मायन किया जाता है, दूसरा 24 घंटे के लिए 44 ± 0.5 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर, पुष्टि करने के लिए 4-6 घंटे के बाद पंजीकरण संभव है। टीकेबी की उपस्थिति।

जब फिल्टर पर कॉलोनियों को सुपरइम्पोज़ करते हैं, तो उन्हें छलनी किया जाता है, फिर परिणामी पृथक कॉलोनियों की पहचान की जाती है। कालोनियों को OKB के रूप में गिना जाता है - यदि वे एंडो पर लाल हैं, तो उनमें ग्राम-नकारात्मक ऑक्सीडेज-नकारात्मक छड़ें होती हैं जो लैक्टोज को 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एसिड और गैस में विघटित करती हैं। कालोनियों को टीकेबी के रूप में गिना जाता है यदि उनमें ग्राम-नकारात्मक ऑक्सीडेज-नकारात्मक छड़ें होती हैं जो एसिड और गैस के लिए 44 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर लैक्टोज को किण्वित करती हैं (योजना संख्या 2)।

योजना 2

प्रकाशन तिथि: 2014-11-02; पढ़ें: 1811 | पेज कॉपीराइट उल्लंघन

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कुल माइक्रोबियल गिनती

जल विश्लेषण की इस पद्धति के साथ, लगभग 0.45 माइक्रोन के छिद्र आकार के साथ एक विशेष झिल्ली के माध्यम से पानी की एक निश्चित मात्रा को पारित किया जाता है। नतीजतन, पानी में मौजूद सभी बैक्टीरिया झिल्ली की सतह पर बने रहते हैं। उसके बाद, बैक्टीरिया के साथ झिल्ली को एक विशेष पोषक माध्यम में 30-37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक निश्चित समय के लिए रखा जाता है। इस अवधि के दौरान, जिसे ऊष्मायन अवधि कहा जाता है, बैक्टीरिया को गुणा करने और अच्छी तरह से परिभाषित कॉलोनियों को बनाने का अवसर मिलता है जिन्हें गिनना आसान होता है। परिणामस्वरूप, आप इसे देख सकते हैं: या यह चित्र भी: चूंकि जल विश्लेषण की इस पद्धति में केवल विभिन्न प्रकार के कॉलोनी बनाने वाले जीवाणुओं की कुल संख्या निर्धारित करना शामिल है, इसके परिणाम स्पष्ट रूप से पानी में रोगजनक रोगाणुओं की उपस्थिति का न्याय नहीं कर सकते हैं। हालांकि, एक उच्च माइक्रोबियल गिनती पानी के एक सामान्य बैक्टीरियोलॉजिकल संदूषण और रोगजनक जीवों की उपस्थिति की उच्च संभावना को इंगित करती है।

पानी का विश्लेषण करते समय, न केवल जहरीले रसायनों की सामग्री को नियंत्रित करना आवश्यक है, बल्कि सूक्ष्मजीवों की संख्या भी है जो पीने के पानी के बैक्टीरियोलॉजिकल संदूषण की विशेषता रखते हैं। टीएमएफ कुल माइक्रोबियल संख्या है। केंद्रीकृत जल आपूर्ति के पानी में, यह संख्या होनी चाहिए 50 सीएफयू / एमएल से अधिक नहीं, और कुओं, कुओं में - 100 सीएफयू / एमएल . से अधिक नहीं

पानी का स्वच्छता और सूक्ष्मजीवविज्ञानी अनुसंधान एक योजनाबद्ध तरीके से किया जाता है
वर्तमान निगरानी के उद्देश्य के साथ-साथ विशेष महामारी विज्ञान के लिए आदेश
किम गवाही। इस तरह के शोध के मुख्य उद्देश्य हैं:

- केंद्रीय जल आपूर्ति (नल का पानी) का पेयजल;

- गैर-केंद्रीकृत जल आपूर्ति का पेयजल;

- सतही और भूमिगत जल स्रोतों से पानी;

- अपशिष्ट जल;

- समुद्र के तटीय क्षेत्रों का पानी;

- स्विमिंग पूल का पानी।

वर्तमान नियामक दस्तावेजों के अनुसार पीने के पानी की सूक्ष्मजीवविज्ञानी स्थिति का आकलन करने के लिए मुख्य संकेतक हैं:

1. टोटल माइक्रोबियल काउंट (TMC) - 1 मिली पानी में मेसोफिलिक बैक्टीरिया की संख्या।

अगर अनुमापांक- पानी की सबसे छोटी मात्रा (मिलीलीटर में) जिसमें कम से कम एक जीवित हो
बीजीकेपी से संबंधित माइक्रोबियल सेल।
बीजीकेपी सूचकांक- 1 लीटर पानी में बीजीकेपी की मात्रा।

3. 20 मिली पानी में सल्फाइट कम करने वाले क्लोस्ट्रीडिया के बीजाणुओं की संख्या।

4. 100 मिली पानी में कोलिफेज की संख्या।

टीएमसी का निर्धारण पीने के पानी के सूक्ष्मजीवविज्ञानी संदूषण के स्तर का आकलन करना संभव बनाता है। बड़े पैमाने पर माइक्रोबियल संदूषण का तत्काल पता लगाने के लिए यह संकेतक अपरिहार्य है।

कुल माइक्रोबियल गिनती- यह मेसोफिलिक एरोबिक और फैकल्टी एनारोबिक सूक्ष्मजीवों की संख्या है जो 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पोषक तत्व अगर पर कॉलोनियां बनाने में सक्षम हैं और 24 घंटों के भीतर, दो गुना वृद्धि पर दिखाई देते हैं।

कुल माइक्रोबियल संख्या का निर्धारण करते समय, परीक्षण पानी का 1 मिलीलीटर एक बाँझ पेट्री डिश में जोड़ा जाता है और 10-12 मिलीलीटर गर्म (44 डिग्री सेल्सियस) पिघला हुआ पोषक तत्व अगर डाला जाता है। माध्यम धीरे-धीरे पानी के साथ मिश्रित होता है, समान रूप से और
बिना हवा के बुलबुले कप के नीचे वितरित करें, फिर ढक्कन के साथ कवर करें और जमने के लिए छोड़ दें। फसलों को 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टैट में इनक्यूबेट किया जाता है। दोनों व्यंजनों में उगाई गई कॉलोनियों की कुल संख्या की गणना करें और औसत मूल्य निर्धारित करें। अंतिम परिणाम परीक्षण पानी के 1 मिलीलीटर में कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सीएफयू) की संख्या के रूप में व्यक्त किया जाता है। 1 मिली पीने के पानी में 50 CFU से अधिक नहीं होना चाहिए

बीजीकेपी की परिभाषा
इसी समय, सामान्य कॉलीफॉर्म बैक्टीरिया - ओकेबी और थर्मोटोलरेंट कोलीफॉर्म बैक्टीरिया - टीकेबी निर्धारित किए जाते हैं।

जीकेबी ग्राम-नकारात्मक, गैर-बीजाणु बनाने वाली छड़ें हैं जो 24-48 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एसिड और गैस के लिए लैक्टोज को किण्वित करती हैं। टीकेबी ओकेबी में से हैं, उनके पास उनके संकेत हैं, लेकिन मैं 44 डिग्री सेल्सियस पर किण्वन करता हूं। एंटरोबैक्टीरिया के निर्धारण के लिए - झिल्ली फिल्टर या अनुमापन की विधि।

माइक्रोबियल संख्या - पेयजल की सूक्ष्मजीवविज्ञानी स्थिति का आकलन करने के लिए मुख्य मानदंड,वर्तमान नियामक दस्तावेजों के आधार पर, टीएमसी (कुल माइक्रोबियल संख्या) है, जो एक पोषक माध्यम में 37 डिग्री के तापमान पर प्रति दिन बनने वाले एक मिलीलीटर पानी में एरोबिक और एनारोबिक बैक्टीरिया की संख्या की विशेषता है। बड़े पैमाने पर माइक्रोबियल संदूषण का तेजी से पता लगाने के लिए यह संकेतक वस्तुतः अपरिहार्य है।

के लिये कुल माइक्रोबियल संख्या का निर्धारणपरीक्षण पानी का एक मिलीलीटर एक बाँझ पेट्री डिश में जोड़ा जाता है, फिर 10-15 मिलीलीटर गर्म (लगभग 44 डिग्री सेल्सियस) पोषक तत्व अगर पिघला हुआ रूप में डाला जाता है। माध्यम को सावधानी से पानी के साथ मिलाया जाता है, समान रूप से वितरित किया जाता है और डिश के तल पर हवा के बुलबुले के बिना, फिर ढक्कन के साथ बंद कर दिया जाता है और पेट्री डिश में जमने तक छोड़ दिया जाता है।

पेयजल राशनिंग के सिद्धांत

दूसरे कप में भी ऐसा ही किया जाता है। थर्मोस्टेट में बुवाई दिन के दौरान 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर की जाती है। फिर, एक माइक्रोस्कोप के तहत डबल आवर्धन पर, दो कप में उगाई गई कॉलोनियों की कुल संख्या की गणना की जाती है, और औसत मूल्य निर्धारित किया जाता है। 1 मिली पीने के पानी में 50 CFU से अधिक नहीं होना चाहिए।

9 जनवरी से 10 अक्टूबर 2014 की अवधि के लिए। संघीय राज्य बजटीय संस्थान "तुला एमवीएल" के पशु चिकित्सा और स्वच्छता विशेषज्ञता विभाग ने 302 पानी के नमूने प्राप्त किए, जिनमें से 693 अध्ययन किए गए, जिनमें से डिजाइन ब्यूरो, टीकेबी -458 अध्ययनों के संकेतकों के लिए।

ये संकेतक क्या हैं, और पीने के पानी का आकलन करते समय वास्तव में उन पर ध्यान क्यों दिया जाता है?

पानी - बुनियादी अवयवकोई भी जीव अपने जीवन में बहुत बड़ी भूमिका निभाता है। यह रोगजनकों सहित विभिन्न सूक्ष्मजीवों का आवास है। रोगजनकों का पता लगाना जल प्रदूषण का सबसे सटीक संकेतक है। इन सूक्ष्मजीवों में एस्चेरिचिया कोलाई समूह के बैक्टीरिया शामिल हैं - ई। कोलाई (एस्चेरिचिया कोलाई समूह के बैक्टीरिया, जिसे कोलिमॉर्फिक और कोलीफॉर्म बैक्टीरिया भी कहा जाता है) - एंटरोबैक्टीरिया परिवार के बैक्टीरिया का एक समूह, जो सैनिटरी माइक्रोबायोलॉजी द्वारा उपयोग किए जाने वाले रूपात्मक और सांस्कृतिक विशेषताओं द्वारा सशर्त रूप से प्रतिष्ठित है। मल संदूषण के एक मार्कर के रूप में। कोलीफॉर्म बैक्टीरिया के बीच, पीने के पानी में सामान्य और थर्मोटोलरेंट कोलीफॉर्म बैक्टीरिया (टीसीबी, टीकेबी) की उपस्थिति अक्सर निर्धारित की जाती है, जो खराब गुणवत्ता वाली पानी की आपूर्ति और जल स्रोत के संभावित फेकल संदूषण को इंगित करता है, जो विकास और प्रसार के लिए एक संभावित खतरा पैदा करता है। आंतों के रोगों से।

तैयार पानी के साथ जल आपूर्ति प्रणालियों में, कोलीफॉर्म बैक्टीरिया का पता नहीं लगाया जाना चाहिए (SanPiN)। कोलीफॉर्म जीवों की उपस्थिति अपर्याप्त जल शोधन, इसके द्वितीयक प्रदूषण और पानी में पोषक तत्वों की उपस्थिति को इंगित करती है। सिस्टम में कोलीफॉर्म जीवों के आकस्मिक प्रवेश की अनुमति है, लेकिन वर्ष के दौरान लिए गए नमूनों के 5% से अधिक नहीं। यदि पीने के पानी के नमूने में टीकेबी, ओकेबी) पाए जाते हैं, तो उन्हें तुरंत दोहराए गए नमूनों में निर्धारित किया जाता है।

टीकेबी (थर्मोटोलरेंट कोलीफॉर्म बैक्टीरिया)। यह 44-45 डिग्री सेल्सियस पर लैक्टोज को किण्वित करने में सक्षम कोलीफॉर्म जीवों का एक समूह है। वे जल्दी से पहचाने जाते हैं, इसलिए, वे फेकल बैक्टीरिया से जल शोधन की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए काम करते हैं।

OKB (कॉमन कॉलिफॉर्म बैक्टीरिया) - OKB समूह में पर्याप्त शामिल हैं बड़ी संख्याएंटरोबैक्टीरिया परिवार के जेनेरा, जिनके प्रतिनिधि लैक्टोज को किण्वित करने में सक्षम हैं: सिट्रोबैक्टर, एंटरोबैक्टर, क्लेबसिएला, सेराटिया, पैंटोआ, रहनेला, आदि। इन सूक्ष्मजीवों में बड़ी संख्या में मुक्त-जीवित सैप्रोफाइट्स भी हैं, इसलिए टीकेबी संकेतक एक महत्वपूर्ण है तकनीकी (सूचक) संकेतक।

तदनुसार, यदि ये बैक्टीरिया पीने के पानी में पाए जाते हैं, तो इसका मतलब है कि सीवेज द्वारा जल प्रदूषण की संभावना है।

OKB, TKB के संकेतकों को निर्धारित करने के परिणाम CFU / 100 ml के रूप में प्रस्तुत किए जाते हैं; सामान्यीकृत मात्रा के तीन गुना अध्ययन में 100 मिलीलीटर पीने के पानी में कोलीफॉर्म बैक्टीरिया का पता नहीं लगाया जाना चाहिए।

जैसा भी हो, पानी में बैक्टीरिया की कोई भी बढ़ी हुई मात्रा एक चेतावनी संकेत है, और जब यह प्रकट होता है, तो पानी के साथ कुछ करने की आवश्यकता होती है।

पीने के पानी के सूक्ष्मजीवविज्ञानी अध्ययन करने के लिए, आप तुला एमवीएल संघीय राज्य बजटीय संस्थान से संपर्क कर सकते हैं।

जल विभिन्न प्रकार के सूक्ष्म जीवों का प्राकृतिक आवास है ( विभिन्न प्रकारबैक्टीरिया, कवक, प्रोटोजोआ और शैवाल)। सभी जलीय जीवों की समग्रता कहलाती है माइक्रोबियल प्लवक। माइक्रोफ्लोरा की मात्रात्मक संरचना मुख्य रूप से पानी की उत्पत्ति से प्रभावित होती है - ताजा सतह (नदियों, नदियों का बहता पानी; और स्थिर झीलें, तालाब, जलाशय), भूमिगत (मिट्टी, जमीन, आर्टेशियन), वायुमंडलीय और खारा पानी। उपयोग की प्रकृति के अनुसार, पीने के पानी (केंद्रीकृत और स्थानीय जल आपूर्ति), स्विमिंग पूल के पानी, चिकित्सा और घरेलू बर्फ को प्रतिष्ठित किया जाता है। अपशिष्ट जल पर विशेष ध्यान देने की आवश्यकता है।

जल निकायों का माइक्रोफ्लोरा दो समूहों द्वारा बनता है:

ऑटोचथोनस (या जलीय) और

एलोचथोनस (विभिन्न स्रोतों से प्रदूषण के साथ बाहर से गिरना) सूक्ष्मजीव।

1. ऑटोचथोनस माइक्रोफ्लोरा - सूक्ष्मजीवों का एक समूह जो लगातार पानी में रहते हैं और गुणा करते हैं। एक नियम के रूप में, पानी का माइक्रोफ्लोरा मिट्टी की माइक्रोबियल संरचना जैसा दिखता है जिसके साथ पानी संपर्क में आता है। इसमें माइक्रोकोकी, सार्किन, कुछ प्रजातियां शामिल हैं रूप बदलनेवाला प्राणीतथा लेप्टोस्पाइरा।अवायवीय से - बकिल्लुस सेरेउसऔर कुछ प्रकार के क्लोस्ट्रीडिया। ये सूक्ष्मजीव खेलते हैं महत्वपूर्ण भूमिकापदार्थों के चक्र में, कार्बनिक अपशिष्ट, फाइबर, आदि को तोड़ना।

2. जल निकायों का जैविक प्रदूषण।

सीवेज, तूफान, पिघले पानी के साथ, कई प्रकार के सूक्ष्मजीव जलाशयों में प्रवेश करते हैं, नाटकीय रूप से माइक्रोबियल बायोकेनोसिस को बदल देते हैं। माइक्रोबियल संदूषण का मुख्य मार्ग अनुपचारित नगरपालिका कचरे का प्रवेश है और अपशिष्ट. इसके अलावा - लोगों को स्नान करते समय, पशुधन, कपड़े धोना आदि। सामान्य मानव माइक्रोफ्लोरा, यूपी, रोगजनक (आंतों में संक्रमण, लेप्टोस्पायरोसिस, यर्सिनीओसिस, पोलियो वायरस, हेपेटाइटिस ए, आदि के प्रेरक एजेंट) के प्रतिनिधि पानी में मिल सकते हैं। यह याद रखना चाहिए कि पानी रोगजनक सूक्ष्मजीवों के प्रजनन के लिए अनुकूल वातावरण नहीं है, जिसके लिए मानव या पशु जीव बायोटोप हैं।

जलाशयों की स्व-शुद्धि

सैप्रोफाइटिक माइक्रोफ्लोरा के प्रतिस्पर्धी सक्रियण के कारण जल निकायों के कार्बनिक प्रदूषण के बाद दूषित सूक्ष्मजीवों से मुक्ति देखी जाती है, जिससे कार्बनिक पदार्थों का तेजी से अपघटन होता है, बैक्टीरिया की संख्या में कमी, विशेष रूप से "फेकल"। एक शब्द "सैप्रोबिटी" है - (सैप्रोस - सड़ा हुआ, ग्रीक) एक जलाशय की विशेषताओं के एक जटिल को दर्शाता है, जिसमें कार्बनिक युक्त पानी में सूक्ष्मजीवों की संरचना और संख्या शामिल है और अकार्बनिक पदार्थकुछ सांद्रता में। जलाशयों में जल के स्व-शुद्धिकरण की प्रक्रिया क्रमिक और निरंतर होती रहती है। पॉलीसैप्रोबिक, मेसाप्रोबिक और ओलिगोसाप्रोबिक क्षेत्र हैं।

पॉलीसैप्रोबिक क्षेत्र- अत्यधिक प्रदूषित क्षेत्र। इनमें बड़ी मात्रा में कार्बनिक पदार्थ होते हैं और लगभग ऑक्सीजन से रहित होते हैं। पॉलीसैप्रोबिक ज़ोन में 1 मिली पानी में बैक्टीरिया की संख्या एक मिलियन या उससे अधिक तक पहुँच जाती है।

मेसाप्रोबिक क्षेत्र- मध्यम प्रदूषण के क्षेत्र। 1 मिली में सूक्ष्मजीवों की संख्या सैकड़ों हजारों होती है।

ओलिगोसाप्रोबिक क्षेत्र- क्षेत्र स्वच्छ जल. उन्हें एक पूर्ण स्व-सफाई प्रक्रिया की विशेषता है। 1 मिली पानी में बैक्टीरिया की संख्या 10 से 1000 तक होती है।

इस प्रकार, जलाशय में प्रवेश करने वाले रोगजनक सूक्ष्मजीव पॉलीसैप्रोबिक क्षेत्रों में काफी प्रचुर मात्रा में होते हैं, धीरे-धीरे मेसोसाप्रोबिक क्षेत्रों में मर जाते हैं, और व्यावहारिक रूप से ओलिगोसाप्रोबिक क्षेत्रों में नहीं पाए जाते हैं।

पानी के सैनिटरी सूक्ष्मजीवविज्ञानी अध्ययन में, ओकेबी, एंटरोकोकी, स्टेफिलोकोसी और रोगजनक सूक्ष्मजीव (साल्मोनेला, हैजा वाइब्रियोस, लेप्टोस्पाइरा, शिगेला, आदि) को अलग किया जाता है। पानी के सभी स्वच्छता और सूक्ष्मजीवविज्ञानी अध्ययनों को संबंधित GOST द्वारा नियंत्रित किया जाता है।

पानी के स्वच्छता और सूक्ष्मजीवविज्ञानी अनुसंधान के लिए आधार:

1. केंद्रीकृत जल आपूर्ति के स्रोत का चयन और उस पर नियंत्रण;
2. केंद्रीकृत जल आपूर्ति के पीने के पानी की कीटाणुशोधन की प्रभावशीलता की निगरानी करना;
3. जल आपूर्ति के भूमिगत स्रोतों (आर्टेसियन कुओं, मिट्टी के पानी, आदि) की निगरानी;
4. व्यक्तिगत जल उपयोग (कुओं, झरनों, आदि) के स्रोतों की निगरानी करना;
5. खुले जलाशयों में पानी की स्वच्छता और महामारी विज्ञान की स्थिति की निगरानी करना;
6. स्विमिंग पूल में पानी की कीटाणुशोधन की प्रभावशीलता की निगरानी करना;
7. अपशिष्ट जल उपचार और कीटाणुशोधन की गुणवत्ता की जाँच करना;
8. संक्रामक रोगों के जल प्रकोप की जांच।

पीने के पानी का स्वच्छता और सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण

वर्तमान में विनियमित दिशा-निर्देशएमयूके 4.2.1018-01.

1. एमसीएच की परिभाषा- 24 घंटे के लिए टी 0 37 0 सी पर पोषक तत्व अगर पर कॉलोनियां बनाने में सक्षम मेसोफिलिक एरोबिक और वैकल्पिक अवायवीय सूक्ष्मजीवों की कुल संख्या।

प्रत्येक नमूने से, 1 मिली के कम से कम दो खंडों को 2 पेट्री डिश में, 1 मिली पानी प्रत्येक + 8-12 मिली पिघला हुआ ठंडा (45-49 0 सी) पोषक तत्व अगर, मिश्रित, जमने की अनुमति दी जाती है, एक में रखा जाता है। थर्मोस्टेट 37 0 सी, 24 घंटे। फिर कप पर उगाई गई सभी कॉलोनियों को 2 गुना के आवर्धन पर गिनें (लेकिन कप पर 300 से अधिक कॉलोनियां नहीं)। व्यंजन पर कॉलोनियों की संख्या को 2 से विभाजित और विभाजित किया जाता है - परिणाम सीएफयू प्रति 1 मिलीलीटर पानी में व्यक्त किया जाता है। प्रति 1 मिली पानी में 50 CFU तक की अनुमति है।

1. सामान्य और थर्मोटोलरेंट कोलीफॉर्म बैक्टीरिया का निर्धारणझिल्ली निस्पंदन विधि (मुख्य विधि)।

सामान्य कोलीफॉर्म जीवाणु - OKB -ग्राम-, ऑक्सीडेज-, गैर-बीजाणु बनाने वाली छड़ें जो विभेदक लैक्टोज मीडिया पर बढ़ने में सक्षम हैं, 24 घंटे के लिए t 0 37 0 C पर लैक्टोज को KG तक किण्वित करती हैं।

थर्मोटोलरेंट कोलीफॉर्म बैक्टीरिया - टीकेबी -ओकेबी में से हैं, उनकी सभी विशेषताएं हैं, इसके अलावा, वे 24 घंटे के लिए टी 0 44 0 सी पर लैक्टोज को सीजी में किण्वित करने में सक्षम हैं।

विधि झिल्ली फिल्टर के माध्यम से पानी की एक निर्धारित मात्रा को छानने, लैक्टोज के साथ एक अंतर पोषक माध्यम पर फसल उगाने और सांस्कृतिक और जैव रासायनिक विशेषताओं द्वारा उपनिवेशों की पहचान पर आधारित है।

100 मिलीलीटर के 3 खंडों का विश्लेषण करें, आप मात्राओं (10, 40, 100, 150 मिलीलीटर) को विभाजित कर सकते हैं। पानी की मापी गई मात्रा को मेम्ब्रेन फिल्टर्स के जरिए फिल्टर किया जाता है। फिल्टर एंडो के माध्यम (प्रति 1 कप में तीन फिल्टर तक) पर रखे जाते हैं और 24 घंटे के लिए टी 0 37 0 सी पर इनक्यूबेट किए जाते हैं।

यदि कोई वृद्धि नहीं है - एक नकारात्मक परिणाम - OKB और TKB का पता नहीं चला। यदि फिल्टर के पीछे एक छाप के साथ विशिष्ट लैक्टोज-पॉजिटिव कॉलोनियां हैं, तो उन्हें ओकेबी और टीकेबी से संबंधित होने की पुष्टि करते हुए गिना जाता है। इसके लिए अनुसंधान

ऑक्सीडेज गतिविधि

ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया से संबंधित

सीजी में लैक्टोज का किण्वन (दो टेस्ट ट्यूबों में - टी 0 37 0 और 44 0 पर)।

परिणाम की गणना सूत्र =а∙100/V द्वारा की जाती है, जहां

a कॉलोनियों की संख्या है (कुल मिलाकर),

V पानी का आयतन है (कुल मिलाकर),

X 100 मिली पानी में कॉलोनियों की संख्या है।

परिणाम 100 मिलीलीटर पानी में सीएफयू ओकेबी (टीकेबी) में व्यक्त किया गया है। आम तौर पर, 100 मिलीलीटर पीने के पानी में ओकेबी (टीकेबी) निर्धारित नहीं किया जाना चाहिए।

यह भी परिभाषित करें

सल्फाइट को कम करने वाले क्लोस्ट्रीडिया के बीजाणु- बीजाणु बनाने वाले अवायवीय छड़ के आकार के जीवाणु जो आयरन-सल्फाइट अगर पर सोडियम सल्फाइट को t 0 44 0 C पर 16-18 घंटों के लिए कम करते हैं। यह विधि अवायवीय परिस्थितियों में आयरन सल्फाइट अगर में फसल उगाने और काली कॉलोनियों की संख्या की गणना पर आधारित है।

वानस्पतिक रूपों को बाहर करने के लिए 20 मिलीलीटर की मात्रा को पानी के स्नान में 75-80 0 C पर 15 मिनट के लिए गर्म किया जाता है, फिर एक जीवाणु फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है, जिसे पिघला हुआ आयरन-सल्फाइट अगर (70-) के साथ एक परखनली में रखा जाता है। 80 0 सी), ठंडा, थर्मोस्टेट टी 0 44 0 सी में 16-18 घंटे के लिए रखा गया।

कोलिफेज की परिभाषा।

कोलीफेज जीवाणु विषाणु होते हैं जो लाइसिंग करने में सक्षम होते हैं ई कोलाईऔर टी 0 37 0 सी पर 18-20 घंटे के बाद पोषक तत्व अगर पर जीवाणु लॉन (सजीले टुकड़े) के लसीका के क्षेत्र बनाते हैं। सजीले टुकड़े की संख्या की गणना नहीं की जाती है - विश्लेषण गुणात्मक है।

पढाई करना अपशिष्टविनियमित एमयू 2.1.5.800 - 99 "अपशिष्ट जल कीटाणुशोधन के लिए राज्य स्वच्छता और महामारी विज्ञान पर्यवेक्षण का संगठन", 1999 एंडो मीडियम के साथ 4 कप, प्रत्येक 0.5 मिली (2 मिली - पूरी मात्रा) के साथ डायरेक्ट इनोक्यूलेशन लगाया जाता है। फिर सीएफयू ओकेबी और टीकेबी की संख्या गिना जाता है, 100 मिलीलीटर पानी के लिए पुनर्गणना की जाती है।

पूल का पानीस्वच्छता और महामारी विज्ञान के नियमों और मानकों के अनुसार जांच की जाती है - सैनपिन 2.1.2.1188-03. पर 100 मिली पूल का पानी 1 से अधिक सीएफयू ओकेबी की अनुमति नहीं है, टीकेबी, कोलिफेज, स्टैफिलोकोकस ऑरियस, आंतों के संक्रमण के रोगजनकों, स्यूडोमोनास एरुगिनोसा की अनुमति नहीं है। मुख्य सूक्ष्मजीवविज्ञानी संकेतकों (ओकेबी, टीकेबी, कोलिफेज और स्टैफिलोकोकस ऑरियस) के लिए प्रयोगशाला नियंत्रण महीने में 2 बार किया जाता है। एक प्रतिकूल महामारी की स्थिति में आंतों के संक्रमण के रोगजनकों की उपस्थिति का अध्ययन किया जाता है।

जब अज्ञात एटियलजि के निमोनिया के छिटपुट मामले प्रकट होते हैं या पूल के आगंतुकों के बीच तीव्र श्वसन संक्रमण के महामारी का प्रकोप होता है, तो पानी का परीक्षण लीजियोनेला की उपस्थिति के लिए किया जाता है ( लेजिओनेला न्यूमोफिलिया), जिसका पुनरुत्पादन योगदान देता है गर्म पानीऔर छींटे। सांस लेते समय, लेगियोनेला युक्त एक महीन एरोसोल फेफड़ों में प्रवेश करता है, जो "लेगियोनेयर्स रोग" या पोंटियाक बुखार का कारण बन सकता है।

आवेदन 2

SanPiN को 2.1.2.1188-03

संक्रामक प्रकृति के रोग,

जिसे स्विमिंग पूल के माध्यम से प्रेषित किया जा सकता है

बीमारी	जल कारक के साथ संबंध की डिग्री
1. एडेनो-वायरल ग्रसनी-कंजंक्टिवल बुखार	+++
2. एपिडर्मोफाइटिस ("तैराक की खुजली")	+++
3. वायरल हेपेटाइटिस ए	++
4. कॉक्ससेकी संक्रमण	++
5. पेचिश	++
6. ओटिटिस, साइनसिसिटिस, टोनिलिटिस, कंजक्टिवाइटिस	++
7. त्वचा का क्षय रोग	++
8. त्वचा के फंगल रोग	++
9. लीजियोनेलोसिस	++
10. एंटरोबियासिस	++
11. जिआर्डियासिस	++
12. क्रिप्टोस्पोरिडियोसिस	++
13. पोलियो	+
14. ट्रेकोमा	+
15. सूजाक vulvovaginitis	+
16. तीव्र साल्मोनेला आंत्रशोथ	+
जल कारक के साथ संबंध: +++ - उच्च, ++ - महत्वपूर्ण, + - संभव

मेज पर टिप्पणियाँ। 100 सेमी 3 पानी में ओकेबी और टीकेबी की मात्रा का अनुमान लगाते हुए, कम से कम तीन मात्रा में पानी (100 सेमी 3 प्रत्येक) का विश्लेषण किया जाना चाहिए। ओकेबी और एमसीएच का मूल्यांकन करते समय, वर्ष के दौरान लिए गए 95% नमूनों में मानक से अधिक की अनुमति नहीं है। वितरण नेटवर्क को पानी की आपूर्ति करने से पहले केवल सतह के स्रोतों से पानी की आपूर्ति प्रणालियों में कोलीफेज निर्धारित किए जाते हैं, वही जिआर्डिया सिस्ट की उपस्थिति पर लागू होता है। सल्फाइट-कम करने वाले क्लॉस्ट्रिडिया के बीजाणुओं की सामग्री केवल जल उपचार प्रौद्योगिकी की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करते समय निर्धारित की जाती है। टीकेबी, ओकेबी, कोलिफेज या संकेतित संकेतकों में से कम से कम एक का पता लगाने के मामले में, टीकेबी, ओकेबी और कोलिफेज के लिए पानी का बार-बार आपातकालीन अध्ययन किया जाता है। समानांतर में, क्लोराइड, अमोनियम नाइट्रोजन, नाइट्रेट्स और नाइट्राइट्स के लिए पानी का परीक्षण किया जाता है। यदि पुनः लिए गए नमूने में प्रति 100 सेमी 3 और / या टीकेबी और / या कॉलिफेज में दो से अधिक टीकेबी पाए जाते हैं, तो आंतों के समूह और / या एंटरोवायरस के रोगजनक बैक्टीरिया के लिए एक अध्ययन किया जाता है। रोगजनक एंटरोबैक्टीरिया और एंटरोवायरस के लिए एक ही अध्ययन महामारी विज्ञान के संकेतों के अनुसार Rospotrebnadzor के क्षेत्रीय केंद्रों के निर्णय द्वारा किया जाता है।

थर्मोटोलरेंट कोलीफॉर्म बैक्टीरिया (टीसीबी)ओकेबी का हिस्सा हैं और उनकी सभी विशेषताएं हैं, लेकिन, उनके विपरीत, वे 24 घंटे के लिए +44 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एसिड, एल्डिहाइड और गैस के लिए लैक्टोज को किण्वित करने में सक्षम हैं। इस प्रकार, टीकेबी ओकेबी से क्षमता में भिन्न है उच्च तापमान पर लैक्टोज को एसिड और गैस में किण्वित करता है।

निर्धारित किए जाने वाले संकेतक, अध्ययन की संख्या और आवृत्ति जल आपूर्ति स्रोत के प्रकार, इस जल आपूर्ति प्रणाली से पानी प्रदान करने वाली आबादी के आकार पर निर्भर करती है। ये आंकड़े में दिए गए हैं सैनपिन 2.1.4.1074–01. पीने के पानी के स्वच्छता और सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण के लिए दिशानिर्देशों में ( रूसी संघ के स्वास्थ्य मंत्रालय के एमयूके 4.2.1018-01) पीने के पानी की गुणवत्ता के स्वच्छता और सूक्ष्मजीवविज्ञानी नियंत्रण के तरीकों को विनियमित किया जाता है।

सूक्ष्मजीवों की कुल संख्या- यह दो गुना वृद्धि के साथ दिखाई देने वाले मेसोफिलिक (+37 डिग्री सेल्सियस के इष्टतम तापमान वाले) एरोबिक और वैकल्पिक एनारोबिक सूक्ष्मजीवों (एमएएफएनएम) की कुल संख्या है, जो +37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पोषक तत्व अगर पर कॉलोनियां बनाने में सक्षम हैं। 24 घंटों के लिए इस सूचक को पहचानने के लिए 1 मिलीलीटर पानी में एक बाँझ पेट्री डिश में जोड़ा जाता है और पिघला हुआ (तापमान +50 डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं) मांस-पेप्टोन अगर से भरा होता है, और एक दिन बाद विकसित कॉलोनियों की संख्या गिना जाता है .

झिल्ली फिल्टर की विधि द्वारा OKB और TKB का निर्धारण

विधि झिल्ली फिल्टर के माध्यम से पानी की कुछ मात्रा को छानने पर आधारित है। इन उद्देश्यों के लिए, 0.45 माइक्रोन के छिद्र व्यास और 35 या 47 मिमी व्यास के आकार वाले फिल्टर का उपयोग किया जाता है (घरेलू फिल्टर "व्लादिपोर" एमएफएएस-एस -1, एमएफएएस-एस -2, एमएफएएस-एमए (नंबर 4-) 6) या विदेशी - आईएसओ 9000 या ईएन 29000)। निर्माता के निर्देशों के अनुसार विश्लेषण के लिए झिल्ली फिल्टर तैयार किए जाते हैं।

अनुमापन विधि द्वारा OKB और TKB का निर्धारण

विधि तरल पोषक माध्यम में पानी की कुछ मात्रा के टीकाकरण के बाद बैक्टीरिया के संचय पर आधारित है, इसके बाद लैक्टोज के साथ एक अंतर घने माध्यम पर पुन: टीकाकरण और सांस्कृतिक और जैव रासायनिक परीक्षणों द्वारा कॉलोनियों की पहचान की जाती है। गुणात्मक विधि (वर्तमान स्वच्छता और महामारी विज्ञान पर्यवेक्षण) द्वारा पीने के पानी के अध्ययन में, 100 सेमी 3 के तीन खंड बोए जाते हैं। पानी के अध्ययन में ओकेबी और टीकेबी (पुन: विश्लेषण) की मात्रा निर्धारित करने के लिए, क्रमशः 100, 10 और 1 सेमी 3 को टीका लगाया जाता है - प्रत्येक श्रृंखला के तीन खंड।

मृदा का स्वच्छता-सूक्ष्मजैविक अध्ययन

मिट्टी विभिन्न प्रकार के सूक्ष्म जीवों को आश्रय प्रदान करती है। तो, अकेले मिट्टी में बैक्टीरिया की संख्या 10 अरब कोशिकाओं प्रति 1 ग्राम तक पहुंच जाती है। सूक्ष्मजीव मिट्टी के निर्माण और मिट्टी के आत्म-शुद्धिकरण में, नाइट्रोजन, कार्बन और प्रकृति में अन्य तत्वों के संचलन में भाग लेते हैं। बैक्टीरिया के अलावा, कवक, प्रोटोजोआ और लाइकेन, जो सायनोबैक्टीरिया के साथ कवक के सहजीवन हैं, इसमें रहते हैं। यूवी किरणों, सुखाने और अन्य कारकों के हानिकारक प्रभावों के कारण मिट्टी की सतह पर अपेक्षाकृत कम सूक्ष्मजीव होते हैं। 10-15 सेंटीमीटर मोटी मिट्टी की कृषि योग्य परत में सूक्ष्मजीवों की संख्या सबसे अधिक होती है। जैसे-जैसे गहराई गहरी होती जाती है, सूक्ष्मजीवों की संख्या 3-4 मीटर की गहराई पर गायब होने तक कम हो जाती है। मिट्टी के माइक्रोफ्लोरा की संरचना इसके प्रकार और स्थिति, वनस्पति की संरचना, तापमान, आर्द्रता आदि पर निर्भर करती है। अधिकांश मृदा सूक्ष्मजीव तटस्थ पीएच, उच्च सापेक्ष आर्द्रता और 25 से 45 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर विकसित होने में सक्षम हैं।

बीजाणु बनाने वाली छड़ें मिट्टी में रहती हैं रोग-कीटतथा क्लोस्लिडियम।गैर-रोगजनक बेसिली (वास। मेगाटेरियम, वास। सबटिलिसऔर आदि।)। स्यूडोमोनास, प्रोटीस और कुछ अन्य बैक्टीरिया के साथ, वे अमोनिफाइंग कर रहे हैं, जो कार्बनिक पदार्थों को खनिज करने वाले पुटीय सक्रिय बैक्टीरिया का एक समूह बनाते हैं। रोगजनक बीजाणु बनाने वाली छड़ें (एंथ्रेक्स, बोटुलिज़्म, टेटनस, गैस गैंग्रीन के प्रेरक एजेंट) लंबे समय तक बने रहने में सक्षम हैं, और कुछ मिट्टी में भी गुणा करते हैं ( क्लोस्ट्रीडियमबोटुलिनम) मिट्टी नाइट्रोजन-फिक्सिंग बैक्टीरिया के लिए भी एक आवास है जो आणविक नाइट्रोजन को आत्मसात करती है। (एज़ोटोबैक्टर, एज़ोमोनास, माइकोबैक्टीरियम)और आदि।)। सायनोबैक्टीरिया या नीले-हरे शैवाल की नाइट्रोजन-फिक्सिंग किस्मों का उपयोग चावल के खेतों की उर्वरता में सुधार के लिए किया जाता है।

आंतों के बैक्टीरिया के परिवार के सदस्य (fam. एंटरोबैक्टीरिया) -ई. कोलाई, टाइफाइड बुखार, साल्मोनेलोसिस और पेचिश के कारक, एक बार मिट्टी में मल के साथ, मर जाते हैं। स्वच्छ मिट्टी में, एस्चेरिचिया कोलाई और प्रोटीस दुर्लभ हैं; महत्वपूर्ण मात्रा में एस्चेरिचिया कोलाई समूह (कोलीफॉर्म बैक्टीरिया) के बैक्टीरिया का पता लगाना मानव और पशु मल के साथ मिट्टी के संदूषण का एक संकेतक है और आंतों के संक्रमण के रोगजनकों के संचरण की संभावना के कारण इसके स्वच्छता और महामारी विज्ञान के नुकसान को इंगित करता है। मिट्टी में प्रोटोजोआ की संख्या 500 से 500,000 प्रति 1 ग्राम मिट्टी के बीच होती है। बैक्टीरिया और कार्बनिक अवशेषों पर भोजन, प्रोटोजोआ मिट्टी के कार्बनिक पदार्थों की संरचना में परिवर्तन का कारण बनता है। मिट्टी में कई कवक भी होते हैं, जिनमें से विषाक्त पदार्थ, मानव भोजन में जमा होकर नशा पैदा करते हैं - मायकोटॉक्सिकोसिस और एफ्लाटॉक्सिकोसिस।

मृदा अनुसंधान के परिणामों को स्वास्थ्य के लिए उनके खतरे की डिग्री और बस्तियों में आबादी की रहने की स्थिति (महामारी विज्ञान के संकेतों के अनुसार), संक्रामक और गैर-संक्रामक रोगों की रोकथाम (निवारक स्वच्छता पर्यवेक्षण) की भविष्यवाणी करते समय ध्यान में रखा जाता है। , वस्तुओं का वर्तमान स्वच्छता नियंत्रण जो प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष रूप से पर्यावरण को प्रभावित करता है।

मिट्टी की स्थिति की वर्तमान स्वच्छता पर्यवेक्षण करते समय, वे एक संक्षिप्त सैनिटरी और सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण तक सीमित होते हैं जो कि मल संदूषण की उपस्थिति और डिग्री का संकेत देते हैं। इस समूह में शामिल संकेतक कार्बनिक प्रदूषकों और एंटरोबैक्टीरिया से मिट्टी की आत्म-शुद्धि की प्रक्रियाओं को भी दर्शाते हैं। निवारक स्वच्छता पर्यवेक्षण के रूप में मिट्टी का एक पूर्ण स्वच्छता और सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण किया जाता है। बायोगेकेनोसिस पर रासायनिक प्रदूषकों के प्रभाव में मिट्टी के माइक्रोबायोटा पर उनकी जीवाणुनाशक कार्रवाई का अध्ययन शामिल है, जिसके परिणामस्वरूप: मिट्टी के सूक्ष्मजीवों के समुदाय में परिवर्तन, मिट्टी की एंजाइमेटिक गतिविधि। महामारी के संकेतों के अनुसार, रोगजनक माइक्रोबायोटा का संकेत दिया जाता है।

प्रयोगशाला में, एक साइट से लिए गए 5 बिंदु मिट्टी के नमूनों से एक औसत नमूना तैयार किया जाता है, अच्छी तरह से मिश्रित और 5 मिनट के लिए एक रबर मूसल के साथ एक बाँझ चीनी मिट्टी के बरतन कप में रगड़ दिया जाता है। विदेशी अशुद्धियों (पौधे की जड़ों, पत्थरों, चिप्स) को एक छलनी के माध्यम से मिट्टी को बहाकर हटा दिया जाता है, जिसे पहले 96% एथिल अल्कोहल के साथ सिक्त कपास झाड़ू से मिटा दिया जाता है। नमूने औसत नमूने से लिए जाते हैं (निर्धारित संकेतकों की सूची के आधार पर 1 से 50-55 ग्राम तक) और बाँझ नल के पानी (पानी के 90 सेमी 3 प्रति मिट्टी का 10 ग्राम) में 1:10 निलंबन तैयार किया जाता है। मिट्टी के कणों की सतह से सूक्ष्मजीवों को हटाने के लिए, तैयार मिट्टी के निलंबन को एक यांत्रिक फैलाव मिक्सर पर 3 मिनट के लिए हिलाया जाता है। 30 एस के लिए निलंबन को व्यवस्थित करने के बाद, मिट्टी के लगातार 10 गुना कमजोर पड़ने को 10 -4 -10 -5 ग्राम / सेमी 3 की एकाग्रता के लिए तैयार किया जाता है।

मिट्टी के सैनिटरी और सूक्ष्मजीवविज्ञानी अध्ययनों के परिणामों का मूल्यांकन निकट क्षेत्रीय निकटता में स्थित एक ही संरचना की मिट्टी के प्रायोगिक और नियंत्रण भूखंडों पर प्राप्त आंकड़ों की तुलना करके किया जाता है। व्यक्तिगत स्वच्छता और सूक्ष्मजीवविज्ञानी मानदंडों के आधार पर मिट्टी की स्वच्छता स्थिति का आकलन करने के लिए योजनाएं प्रस्तुत की गई हैं एमयू नंबर 14446-76(तालिका 2)।

तालिका 2

	टिटर (जी)			थर्मोफिलिक सूक्ष्मजीवों का सूचकांक (कोशिकाओं की संख्या/जी)
	बीजीकेपी	नाइट्रिफाइंग बैक्टीरिया	क्लोस्ट्रीडिया
			0.01 और ऊपर
प्रदूषित
अत्यधिक प्रदूषित	0.009 और नीचे	0.0009 और नीचे	0.00009 और नीचे

पर एमयू 2.1.7.730-99 "आबादी वाले क्षेत्रों में मिट्टी की गुणवत्ता का स्वच्छ मूल्यांकन"आबादी वाले क्षेत्रों में मिट्टी की महामारी के खतरे का आकलन करने के लिए एक योजना प्रस्तुत की गई है। इस दस्तावेज़ में, मिट्टी पर जैविक भार की तीव्रता का आकलन करने के लिए, सीजीबी और एंटरोकोकस इंडेक्स जैसे संकेतकों का उपयोग किया जाता है, और मिट्टी के महामारी के खतरे का आकलन करने के लिए रोगजनक एंटरोबैक्टीरिया और एंटरोवायरस का उपयोग किया जाता है।

वायु पर्यावरण के माइक्रोबियल अवलोकन का अध्ययन

सूक्ष्मजीव मिट्टी, पानी के साथ-साथ शरीर की सतह से, श्वसन पथ से और मानव और पशु लार की बूंदों के साथ हवा में प्रवेश करते हैं। कोकॉइड और रॉड के आकार के बैक्टीरिया, बेसिली, क्लोस्ट्रीडिया, एक्टिनोमाइसेट्स, कवक और वायरस यहां पाए जाते हैं। वायु को श्वसन संक्रमण के संचरण में एक कारक के रूप में माना जाता है, जिसमें रोगजनक वायुजनित बूंदों या वायुजनित धूल द्वारा संचरित होता है। सूर्य के प्रकाश और अन्य कारक वायु माइक्रोफ्लोरा की मृत्यु में योगदान करते हैं। हवा के माइक्रोबियल संदूषण को कम करने के लिए, आने वाली हवा के वेंटिलेशन और शुद्धिकरण (निस्पंदन) के संयोजन में परिसर की गीली सफाई की जाती है। एयरोसोल कीटाणुशोधन और पराबैंगनी विकिरण लैंप के साथ परिसर के उपचार का भी उपयोग किया जाता है (उदाहरण के लिए, सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगशालाओं और ऑपरेटिंग इकाइयों में)।

कई सूक्ष्मजीव इनडोर परिसर की हवा में निहित होते हैं, जिनमें से माइक्रोबियल संदूषण परिसर की सफाई की स्थिति, रोशनी के स्तर, कमरे में लोगों की संख्या, वेंटिलेशन की आवृत्ति आदि पर निर्भर करता है। सूक्ष्मजीवों की एक बड़ी संख्या बड़े शहरों की हवा में मौजूद है, एक छोटी संख्या - ग्रामीण इलाकों की हवा में। जंगलों, पहाड़ों और समुद्रों के ऊपर हवा में विशेष रूप से कुछ सूक्ष्मजीव होते हैं।

हवा की माइक्रोबायोलॉजिकल परीक्षा सूक्ष्मजीवों की कुल सामग्री के निर्धारण के साथ-साथ हवा के 1 मीटर 3 में स्टेफिलोकोसी प्रदान करती है। कुछ मामलों में, ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया, मोल्ड और खमीर जैसी कवक के लिए हवा का परीक्षण किया जाता है। महामारी के संकेतों के अनुसार, हवा में पाए जाने वाले रोगजनकों के स्पेक्ट्रम का विस्तार किया जा सकता है।

हवा के नमूने क्रोटोव तंत्र का उपयोग करके आकांक्षा विधि द्वारा लिए जाते हैं।

कोच अवसादन विधि का प्रयोग काफी स्वीकार्य है। स्वास्थ्य देखभाल सुविधाओं के निम्नलिखित परिसर अध्ययन के अधीन हैं - संचालन कक्ष, ड्रेसिंग और उपचार कक्ष, सड़न रोकनेवाला वार्ड (बक्से), एनेस्थिसियोलॉजी और पुनर्जीवन विभाग के वार्ड, चिकित्सा विभागों के वार्ड और गलियारे, फार्मेसियों के परिसर, नसबंदी और प्रसूति - रक्त आधान के स्त्री रोग विभाग और स्टेशन (विभाग)।

माइक्रोबियल वायु प्रदूषण की डिग्री के अनुमानित आकलन के लिए कोच विधि द्वारा हवा का अध्ययन अत्यंत दुर्लभ मामलों में किया जाता है। ऑपरेटिंग कमरे की हवा में सूक्ष्मजीवों की कुल संख्या निर्धारित करने के लिए, काम शुरू करने से पहले, पोषक तत्वों के साथ प्लेटें खोलें और उन्हें ऑपरेटिंग टेबल की ऊंचाई पर लगभग सेट करें - केंद्र में एक प्लेट और कमरे के कोनों में चार (" लिफाफा विधि") 10 मिनट के लिए, और स्टैफिलोकोकस ऑरियस का पता लगाने के लिए ( जर्दी-नमक अगर (वाईएसए) के साथ कप का उपयोग किया जाता है - 40 मिनट के लिए फसलों को थर्मोस्टेट में +37 डिग्री सेल्सियस और कमरे के तापमान पर एक दिन में ऊष्मायन किया जाता है, फिर संख्या कालोनियों की गणना की जाती है। पोषक माध्यम की 2 सतहों, एक्सपोजर के 5 मिनट में, बैक्टीरिया की इतनी मात्रा जमा हो जाती है जो 10 लीटर हवा में निहित होती है (1000 लीटर 1 मीटर 3 में निहित होती है)। एक ही समय में, अधिक पोषक तत्वों की प्लेटों पर सूक्ष्मजीवों की 5 से अधिक कालोनियों को विकसित नहीं होना चाहिए, और स्टैफिलोकोकस ऑरियस को नहीं दिखाना चाहिए।

खाद्य पदार्थों का स्वच्छता और सूक्ष्म जैविक नियंत्रण

खाद्य उत्पादों को विभिन्न सूक्ष्मजीवों से दूषित किया जा सकता है, जो उनके खराब होने, खाद्य विषाक्तता और नशा के विकास के साथ-साथ एंथ्रेक्स, ब्रुसेलोसिस, तपेदिक आदि जैसे संक्रमणों की ओर जाता है। पशु रोग, चोट या इसके रखरखाव की प्रतिकूल परिस्थितियां शरीर की सुरक्षात्मक बाधाओं के उल्लंघन और सूक्ष्मजीवों के आमतौर पर बाँझ ऊतकों और अंगों (इंट्राविटल सीडिंग) में अनुवाद (स्थानांतरण) में योगदान करती हैं। नतीजतन, वध किए गए जानवर के ऊतक प्रोटोजोआ, क्लोस्ट्रीडिया और अन्य रोगाणुओं से दूषित हो जाते हैं; स्टेफिलोकोसी और स्ट्रेप्टोकोकी के दूध में मास्टिटिस के साथ मारा। सूक्ष्मजीवों के साथ खाद्य उत्पादों का द्वितीयक संदूषण भी संभव है। इस मामले में, पर्यावरणीय वस्तुएं (मिट्टी, पानी, परिवहन, आदि) के साथ-साथ बीमार लोग और बैक्टीरिया वाहक प्रदूषण के स्रोत हैं। मांस और मांस उत्पादों के कम भंडारण तापमान पर, यहां तक ​​कि जमे हुए मांस में भी, साइकोफिलिक स्थितियों (स्यूडोमोनास, प्रोटीस, एस्परगिलस, पेनिसिलियम, आदि) के तहत प्रजनन करने में सक्षम रोगाणुओं का प्रभुत्व हो सकता है। मांस में रहने वाले सूक्ष्मजीव इसे श्लेष्मा बनाते हैं; यह क्लोस्ट्रीडियम, प्रोटीन, स्यूडोमोनास और कवक के कारण किण्वन और क्षय की प्रक्रियाओं को विकसित करता है।

अनाज की फसलें, उच्च आर्द्रता की स्थिति में नट कवक (एस्परगिलस, पेनिसिलियम, फुसैरियम, आदि) से दूषित हो सकते हैं, जो भोजन मायकोटॉक्सिकोसिस के विकास का कारण बनता है।

मांस व्यंजन (जेली, मांस सलाद, कीमा बनाया हुआ मांस व्यंजन) साल्मोनेला, शिगेला, डायरियाजेनिक एस्चेरिचिया कोलाई, प्रोटीस, स्टेफिलोकोसी के एंटरोटॉक्सिजेनिक उपभेदों, एंटरोकोकी से जुड़े रोगों का कारण बन सकता है, जो उनमें गुणा करते हैं, क्लोस्लिडियम परफ्रेंजेंसतथा बकिल्लुस सेरेउस।

दूध और डेयरी उत्पाद ब्रुसेलोसिस, तपेदिक और शिगेलोसिस के लिए एक संचरण कारक हो सकते हैं। साल्मोनेला, शिगेला और स्टेफिलोकोकी के डेयरी उत्पादों में प्रजनन के परिणामस्वरूप खाद्य विषाक्तता का विकास भी संभव है। अंडों के अंतर्जात प्राथमिक साल्मोनेला संक्रमण में अंडे, अंडे का पाउडर और मिलावट, विशेष रूप से बत्तख के अंडे, साल्मोनेलोसिस का कारण होते हैं।

मछली और मछली उत्पादों के बैक्टीरिया से दूषित होने की संभावना अधिक होती है क्लोस्लिडियम बोटुलिनमतथा विब्रियो पैराहामोलिलिकस- खाद्य नशा और विषाक्तता के प्रेरक एजेंट। बड़ी मात्रा में साल्मोनेला, प्रोटीस, से दूषित मछली उत्पादों को खाने पर भी ये रोग देखे जाते हैं। बैसिलस सेरेस, क्लोस्लिडियम परफ्रेंजेंस।

सब्जियां और फल दूषित हो सकते हैं और डायरियाजेनिक एस्चेरिचिया कोलाई, शिगेला, प्रोटीस, स्टेफिलोकोसी के एंटरोपैथोजेनिक उपभेदों के साथ बीजित हो सकते हैं। नमकीन खीरे किसके कारण होने वाले विषाक्तता का कारण हो सकते हैं विब्रियो पैराहामोलिटिकस।

खाद्य उत्पादों के सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण के सभी परिणाम 48-72 घंटों से पहले प्राप्त नहीं किए जा सकते हैं, अर्थात। जब उत्पाद पहले से ही बेचा जा सकता है। इसलिए, इन संकेतकों पर नियंत्रण पूर्वव्यापी प्रकृति का है और खाद्य उत्पादों का उत्पादन या बिक्री करने वाले उद्यम के स्वच्छता और स्वच्छ मूल्यांकन के उद्देश्यों को पूरा करता है।

बढ़े हुए सामान्य माइक्रोबियल संदूषण, कोलीफॉर्म बैक्टीरिया का पता लगाना, तैयार उत्पाद की तैयारी और / या भंडारण के दौरान तापमान शासन के उल्लंघन का सुझाव देता है। रोगजनक सूक्ष्मजीवों का पता लगाना कैंटीन, व्यापार उद्यम की महामारी विज्ञान की परेशानी का एक संकेतक माना जाता है।

एक वैकल्पिक सिद्धांत के अनुसार सूक्ष्मजीवों के अधिकांश समूहों के लिए खाद्य सुरक्षा के सूक्ष्मजीवविज्ञानी संकेतकों की राशनिंग की जाती है, अर्थात। उत्पाद का द्रव्यमान सामान्यीकृत होता है, जिसमें एस्चेरिचिया कोलाई समूह के बैक्टीरिया, अधिकांश अवसरवादी सूक्ष्मजीव, साथ ही साथ रोगजनक सूक्ष्मजीव, सहित। साल्मोनेला और लिस्टेरिया monocytogenes. अन्य मामलों में, मानक उत्पाद (सीएफयू / जी, सेमी 3) के 1 ग्राम (सेमी 3) में कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों की संख्या को दर्शाता है।

बड़े पैमाने पर खपत वाले उत्पादों में, जिसके लिए तालिकाओं में सैनपिन 2.3.2.1078-01। खाद्य उत्पादों की सुरक्षा और पोषण मूल्य के लिए स्वच्छ आवश्यकताएंकोई सूक्ष्मजीवविज्ञानी मानक नहीं हैं, रोगजनक सूक्ष्मजीव, सहित। उत्पाद के 25 ग्राम में साल्मोनेला की अनुमति नहीं है।

स्वच्छता और बैक्टीरियोलॉजिकल नियंत्रण खाद्य उत्पादों की तैयारी और बिक्री की वस्तुओं के अधीन होना चाहिए।

सैनिटरी और माइक्रोबायोलॉजिकल स्टडी के डेटा से जांच की गई वस्तुओं की सैनिटरी और हाइजीनिक स्थिति का निष्पक्ष मूल्यांकन करना, सैनिटरी शासन के उल्लंघन की पहचान करना और उन्हें खत्म करने के लिए लक्षित उपायों को तुरंत अंजाम देना संभव हो जाता है।

सूक्ष्मजीवविज्ञानी अनुसंधान के लिए विभिन्न उपकरणों और सूची से नमूना लेने के कई तरीके हैं: स्वैब, प्रिंट, अगर भरने के तरीके। इनमें से टैम्पोन धोने की विधि का सबसे अधिक उपयोग किया जाता है।

स्वच्छता और सूक्ष्मजीवविज्ञानी नियंत्रण ई। कोलाई समूह (बीजीकेपी) के बैक्टीरिया की धुलाई में पता लगाने पर आधारित है - अध्ययन के तहत वस्तुओं के मल संदूषण के संकेतक। स्टेफिलोकोकस ऑरियस, आंतों के परिवार के रोगजनक बैक्टीरिया, कुल माइक्रोबियल संदूषण का निर्धारण संकेतों के अनुसार किया जाता है। उदाहरण के लिए, कन्फेक्शनरी की दुकानों, डेयरी रसोई और चिकित्सा संस्थानों की खाद्य इकाइयों की जांच करते समय स्टेफिलोकोसी का पता लगाने के लिए स्वैब लेना आवश्यक है।

स्वच्छता और सूक्ष्मजीवविज्ञानी नियंत्रण की वस्तुएं:

∨ भोजन (जल आपूर्ति) श्रमिकों के हाथों और चौग़ा से धुलाई;

∨ उपकरण, सूची, बर्तन और अन्य वस्तुएं;

∨ तैयार भोजन, पाक और खराब होने वाले उत्पाद;

तकनीकी प्रक्रिया के दौरान कच्चे माल और अर्द्ध-तैयार उत्पाद (महामारी विज्ञान के संकेतों के अनुसार);

केंद्रीकृत और विशेष रूप से विकेन्द्रीकृत जल आपूर्ति स्रोतों से पीने का पानी।

कच्चे उत्पादों के प्रसंस्करण में शामिल कर्मियों के हाथों से हाथ धोने का काम शुरू होने से पहले एकत्र किया जाता है। स्वैब को 2 घंटे के भीतर बैक्टीरियोलॉजिकल प्रयोगशाला में पहुंचा दिया जाता है। उन्हें +1-10 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 6 घंटे से अधिक समय तक संग्रहीत और ले जाया जा सकता है।

प्रयोगशाला में, केसलर मीडिया पर लैक्टोज या कोडा के साथ स्वैब का टीका लगाया जाता है, जबकि एक स्वाब को माध्यम के साथ टेस्ट ट्यूब में उतारा जाता है और शेष वाशिंग तरल को स्थानांतरित कर दिया जाता है। केसलर और कोडा मीडिया पर संस्कृतियों को 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया जाता है।

18-24 घंटों के बाद, केसलर माध्यम वाली सभी परखनलियों को एंडो माध्यम वाले कपों के क्षेत्रों में टीका लगाया जाता है; कोडा माध्यम से, टीकाकरण केवल तभी किया जाता है जब माध्यम का रंग बदलता है (मूल बैंगनी से पीले या हरे रंग में) या बादल बन जाता है . एंडो माध्यम पर टीका 18-24 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर उगाए जाते हैं।

बीजीकेपी की कॉलोनियों से स्मीयर तैयार किए जाते हैं, ग्राम द्वारा दागे गए, सूक्ष्म रूप से, यदि आवश्यक हो, तो उन्हें एस्चेरिचिया कोलाई समूह के बैक्टीरिया के लिए आम तौर पर स्वीकृत परीक्षणों के अनुसार अतिरिक्त रूप से पहचाना जाता है। सैनिटरी और माइक्रोबायोलॉजिकल परीक्षा के परिणामों का मूल्यांकन करते समय, वे मानकों से आगे बढ़ते हैं कि खाद्य सुविधाओं से लिए गए स्वैब में बीजीकेपी अनुपस्थित होना चाहिए। सफाई की सतहों से स्वैब में बीजीकेपी का पता लगाना, काम की वस्तुओं, इन्वेंट्री, उपकरण, हाथों और कर्मियों के सैनिटरी कपड़ों के लिए तैयार सैनिटरी शासन के उल्लंघन का संकेत देता है। स्वैब के एक महत्वपूर्ण प्रतिशत में सीजीबी का बार-बार पता लगाने के मामले में, रोगजनक एंटरोबैक्टीरिया की उपस्थिति के लिए स्वैब का परीक्षण करने की सिफारिश की जाती है। उसी समय, स्वैब और फ्लशिंग द्रव को संवर्धन मीडिया - सेलेनाइट शोरबा या मैग्नीशियम माध्यम (मुलर और कॉफ़मैन मीडिया का उपयोग करना संभव है) पर टीका लगाया जाता है। आगे का शोध आम तौर पर स्वीकृत पद्धति के अनुसार किया जाता है।

दूध और डेयरी उत्पादों का अध्ययन

डेयरी उत्पादों का माइक्रोफ्लोरा

दूध कई सूक्ष्मजीवों के विकास के लिए एक बहुत ही अनुकूल पोषक माध्यम है। संक्रमित दूध और डेयरी उत्पाद खाने के बाद, टाइफाइड बुखार, पेचिश, हैजा, एस्चेरिचियोसिस, ब्रुसेलोसिस, तपेदिक, स्कार्लेट ज्वर, टॉन्सिलिटिस, क्यू बुखार, पैर और मुंह की बीमारी, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस, साल्मोनेला विषाक्त संक्रमण, स्टेफिलोकोकल एंटरोटॉक्सिन विषाक्तता जैसे संक्रमण। आदि।

दूध और डेयरी उत्पादों के विशिष्ट और गैर-विशिष्ट माइक्रोफ्लोरा हैं।

प्रति दूध और डेयरी उत्पादों के विशिष्ट माइक्रोफ्लोरा रोगाणुओं में शामिल हैं - लैक्टिक एसिड, अल्कोहल और प्रोपियोनिक एसिड किण्वन के रोगजनक। इन सूक्ष्मजीवों की महत्वपूर्ण गतिविधि के कारण सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रक्रियाएं किण्वित दूध उत्पादों (पनीर, केफिर, दही दूध, एसिडोफिलस, आदि) की तैयारी के अंतर्गत आती हैं।

लैक्टिक एसिड किण्वन बैक्टीरिया माना जाता है दूध और डेयरी उत्पादों का सामान्य माइक्रोफ्लोरा . दूध और डेयरी उत्पादों के खट्टेपन में मुख्य भूमिका लैक्टिक स्ट्रेप्टोकोकी द्वारा निभाई जाती है। एस लैक्टिस, एस क्रेमारिसऔर अन्य। लैक्टिक एसिड स्ट्रेप्टोकोकी की कम सक्रिय दौड़ ( एस। साइट्रोवोरस, एस। लैक्टिस सबस्प। डायसेटाइलैक्टिस) वाष्पशील एसिड और एरोमेटिक्स का उत्पादन करते हैं और इसलिए पनीर के उत्पादन में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया के समूह में लैक्टिक एसिड स्टिक्स भी शामिल हैं: लैक्टोबैक्टीरियम बुल्गारिकम, लैक्टोबैक्टीरियम कैसी, लैक्टोबैक्टीरियम एसिडोफिलसआदि।

दूध और डेयरी उत्पादों में अल्कोहलिक किण्वन के मुख्य प्रेरक कारक खमीर हैं ( सैक्रोमाइसेस लैक्टिसऔर आदि।)।

दूध का गैर-विशिष्ट माइक्रोफ्लोरा पुटीय सक्रिय बैक्टीरिया से बना है रूप बदलनेवाला प्राणी), एरोबिक और एनारोबिक बेसिली ( B. सबटिलिस, B. मेगाथेरियम, C. पुटरीफम) गंभीर प्रयास

थन में दूध का माइक्रोबियल संदूषण पहले से ही शुरू हो जाता है। दूध निकालने की प्रक्रिया में, इसका अतिरिक्त बीज थन की त्वचा की सतह से, हाथों से, बर्तन से होता है, जहां यह कमरे की हवा से प्रवेश करता है। इस अतिरिक्त संदूषण की तीव्रता आम तौर पर इस बात पर निर्भर करती है कि दूध प्राप्त करते समय बुनियादी स्वच्छता और स्वच्छता की स्थिति कैसे देखी जाती है। खराब दूध भंडारण की स्थिति भी इसमें माइक्रोफ्लोरा के और विकास में योगदान कर सकती है।

जीवाणुनाशक चरण। ताजा दूध वाला दूध, हालांकि इसमें पहले से ही प्रति 1 सेमी 3 (मुख्य रूप से स्टेफिलोकोसी और स्ट्रेप्टोकोकी) में सैकड़ों रोगाणु होते हैं, इसमें सामान्य एंटीबॉडी की उपस्थिति के कारण जीवाणुनाशक गुण होते हैं। इसलिए कुछ समय के लिए दूध में बैक्टीरिया के विकास में देरी होती है। इस अवधि को जीवाणुनाशक चरण कहा जाता है। जीवाणुनाशक चरण की अवधि पशु की शारीरिक विशेषताओं के आधार पर 2-36 घंटे तक होती है (दुद्ध निकालना की प्रारंभिक अवधि में, दूध की जीवाणुनाशक गतिविधि अधिक होती है)।

दूध को ऊंचे तापमान (30-37 डिग्री सेल्सियस) पर रखने से जीवाणुनाशक चरण की अवधि काफी कम हो जाती है। रोगाणुओं के साथ दूध के गहन अतिरिक्त संदूषण द्वारा भी यही प्रभाव डाला जाता है।

जीवाणुनाशक चरण समाप्त होने के बाद, माइक्रोफ्लोरा का विकास शुरू होता है। इसकी प्रजातियों की संरचना समय के साथ पर्यावरण के जैव रासायनिक गुणों में परिवर्तन के प्रभाव में और माइक्रोबियल प्रजातियों के बीच विरोधी और सहजीवी संबंधों के परिणामस्वरूप बदलती है।

मिश्रित माइक्रोफ्लोरा का चरण। यह लगभग 12 घंटे तक रहता है। इस अवधि के दौरान, रोगाणुओं के किसी भी प्रजाति समूहों की प्रबलता अभी तक नहीं हुई है, क्योंकि पोषक तत्व सब्सट्रेट और स्थानिक संभावनाओं की प्रचुरता कई प्रकार के सूक्ष्मजीवों को काफी स्वतंत्र रूप से विकसित करने की अनुमति देती है।

लैक्टिक एसिड स्ट्रेप्टोकोकी का चरण। इस चरण में, नामित समूह के सूक्ष्मजीव प्रबल होते हैं ( एस लैक्टिस, एस टर्मोफिलस, एस क्रेमोरिसऔर आदि।)। लैक्टोज को उनके द्वारा लैक्टिक एसिड में तीव्रता से परिवर्तित किया जाता है, प्रतिक्रिया एसिड पक्ष में बदल जाती है। लैक्टिक एसिड का संचय, भविष्य में, लैक्टिक एसिड स्ट्रेप्टोकोकी की मृत्यु और अधिक एसिड-प्रतिरोधी लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया द्वारा उनके प्रतिस्थापन की ओर जाता है। यह तीसरे चरण की शुरुआत को चिह्नित करते हुए 48 घंटों के बाद होता है।

लैक्टिक एसिड स्टिक्स का चरण। इसमें लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया के रॉड के आकार के रूप एक प्रमुख स्थान प्राप्त करते हैं। ( एल. लैक्टिस, एल. क्रुसी, एल. बुल्गारिकुमऔर आदि।)। पर्यावरण की परिणामी एसिड प्रतिक्रिया से विकास में बाधा आती है और अन्य प्रकार के जीवाणुओं की क्रमिक मृत्यु होती है।

तीसरे चरण के अंत तक, लैक्टिक एसिड माइक्रोफ्लोरा के विकास के लिए और अवसर समाप्त हो जाते हैं, और कवक उन्हें बदलने के लिए आते हैं, जिसके लिए लैक्टिक एसिड पोषक तत्व सब्सट्रेट के रूप में कार्य करता है।

कवक माइक्रोफ्लोरा का चरण। इस अवधि के दौरान, मोल्ड और यीस्ट विकसित होते हैं, जिनमें से महत्वपूर्ण गतिविधि उत्पाद द्वारा इसके पोषण मूल्य की हानि की ओर ले जाती है। यीस्ट मुख्य रूप से जीनस की प्रजातियों द्वारा दर्शाए जाते हैं टोरुला Saccharomycetes की कुछ प्रजातियां आमतौर पर कम पाई जाती हैं।

पाए गए सांचों में से: दूध का साँचा ( ओडियम लैक्टिस), दही वाले दूध और खट्टा क्रीम की सतह को फुलाने के रूप में, साथ ही साथ एस्परगिलस, पेनिसिलियम और म्यूकोरेसी को कवर करना।

कवक वनस्पतियों की क्रिया से पर्यावरण निष्प्रभावी हो जाता है, और यह इसे फिर से जीवाणुओं के लिए उपयुक्त बनाता है। पुटीय सक्रिय बैक्टीरिया का विकास होता है, जिससे कैसिइन का प्रोटियोलिसिस होता है, और अंत में, एनारोबिक बीजाणु बनाने वाले ब्यूटिरिक बैक्टीरिया का एक समूह होता है।

दूध के सभी कार्बनिक पदार्थों के पूर्ण खनिजकरण की शुरुआत के साथ ही बदलते माइक्रोफ्लोरा की गतिविधि बंद हो जाती है।

कुछ शर्तों के तहत, माइक्रोबियल बायोकेनोज़ को बदलने की प्रक्रिया उपरोक्त योजना से विचलित हो सकती है। तो, लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया को शुरू से ही एस्चेरिचिया कोलाई समूह के रोगाणुओं द्वारा बाधित किया जा सकता है, यदि बाद वाले बड़ी संख्या में मौजूद हैं। यीस्ट अल्कोहल की ध्यान देने योग्य सांद्रता उत्पन्न कर सकते हैं, जो कि केफिर (0.2–0.6%) और विशेष रूप से कौमिस (0.9–2.5%) जैसे उत्पादों में होता है। अल्कोहल की उपस्थिति एसिटिक एसिड बैक्टीरिया के बाद के विकास के लिए स्थितियां बनाती है जो अल्कोहल को एसिटिक एसिड में किण्वित करते हैं। दूध में माइक्रोफ्लोरा को बाधित और बेअसर करने वाले एंटीबायोटिक्स और अन्य पदार्थों की उपस्थिति भी लैक्टिक एसिड प्रक्रियाओं को धीमा कर सकती है।