کنتراست فاز و میکروسکوپ آنوپترال. میکروسکوپ کنتراست فاز اصل عملکرد میکروسکوپ کنتراست فاز

نمودار یک میکروسکوپ کنتراست فاز.
1. حلقه کندانسور
2. صفحه موضوع
3. صفحه فاز
4. تصویر اصلی.
برخلاف نور مرجع، نور جسم پراکنده شده بر روی نمونه، در مناطق نشان داده شده با رنگ آبی، صفحه فاز را دور می زند، بنابراین طول مسیر نوری آن متفاوت است.

میکروسکوپ کنتراست فاز- روشی برای به دست آوردن تصاویر در میکروسکوپ های نوری، که در آن تغییر فاز یک موج الکترومغناطیسی به کنتراست شدت تبدیل می شود. میکروسکوپ کنتراست فاز توسط فریتز زرنیک کشف شد که برای آن جایزه نوبل را در سال 1953 دریافت کرد.

اصول کارکرد، اصول جراحی، اصول عملکرد

برای به دست آوردن یک تصویر کنتراست فاز، نور منبع به دو پرتو نور منسجم تقسیم می شود که یکی از آنها پرتو مرجع و دیگری پرتو جسم است که از طریق مسیرهای نوری مختلف حرکت می کند. میکروسکوپ به گونه ای تنظیم می شود که در صفحه کانونی که تصویر در آن شکل می گیرد، تداخل بین این دو پرتو آنها را خنثی می کند.

تصویر یک سلول در زیر میکروسکوپ کنتراست فاز

طول مسیر نوری با استفاده از صفحه فاز تغییر می کند (انگلیسی)روسی ، روی حلقه فاز قرار دارد. وقتی نمونه ای در مسیر یکی از پرتوها قرار می گیرد، شکست نور در آن مسیر نوری و در نتیجه فاز را تغییر می دهد که شرایط تداخل را تغییر می دهد.

میکروسکوپ فاز کنتراست به ویژه در زیست شناسی محبوب است زیرا نیازی به رنگ آمیزی اولیه سلول ندارد که می تواند باعث مرگ آن شود.

تاریخچه کشف

فیزیکدان، ریاضیدان و شیمیدان هلندی فریتز زرنیک در سال 1930 شروع به کار در زمینه اپتیک کرد. در همان سال او روش فاز-کنتراست را کشف کرد. در طول دهه‌های 1930 و 1940، زرنیک به سایر حوزه‌های اپتیک کمک کرد، در حالی که روش کنتراست فاز مورد توجه دایره وسیعی از دانشمندان قرار نگرفت. روش جدید تا زمان جنگ جهانی دوم تحت رادار جامعه علمی باقی ماند، زمانی که کشف زرنیک برای ایجاد اولین میکروسکوپ کنتراست فاز در زمان اشغال هلند توسط آلمانی ها مورد استفاده قرار گرفت. در طول جنگ، بسیاری از تولیدکنندگان شروع به تولید میکروسکوپ های کنتراست فاز کردند و به طور گسترده در تحقیقات بیولوژیکی و پزشکی مورد استفاده قرار گرفتند.

پیوندها

منابع

بنیاد ویکی مدیا 2010.

ببینید «میکروسکوپ کنتراست فاز» در فرهنگ‌های دیگر چیست:

میکروسکوپ با میکروسکوپ کنتراست فاز را ببینید. (منبع: فرهنگ اصطلاحات میکروبیولوژی) ... فرهنگ لغت میکروبیولوژی

روشی برای بررسی میکروسکوپی مبتنی بر به دست آوردن با کمک دستگاه های خاص، تصویر کنتراست ساختارهای میکرواشیاء شفاف بی رنگ با چگالی متفاوت، به عنوان مثال، میکروارگانیسم های زنده و بافت...

میکروسکوپ فاز کنتراست- میکروسکوپ کنتراست فاز، میکروسکوپ، تکنیک میکروسکوپی را ببینید. فرهنگ لغت دایره المعارف دامپزشکی

میکروسکوپ نوری کنتراست فاز- میکروسکوپ نوری کنتراست فاز 4.34: روشی برای تجزیه و تحلیل میکروسکوپی مبتنی بر تبدیل شیفت فاز دیفرانسیل امواج نوری که از یک نمونه می گذرد به تفاوت در دامنه ها. فرهنگ لغت - کتاب مرجع شرایط اسناد هنجاری و فنی

M. از اجسام زنده بدون رنگ که در آنها کنتراست تصویر با تبدیل اختلاف فاز پرتوهای نوری که از جسم عبور می کند به دامنه افزایش می یابد ... فرهنگ لغت بزرگ پزشکی

نام عمومی روش های مشاهده اشیاء غیر قابل تشخیص برای چشم انسان از طریق میکروسکوپ. برای جزئیات بیشتر، هنر را ببینید. (میکروسکوپ را ببینید). فرهنگ لغت دایره المعارف فیزیکی. م.: دایره المعارف شوروی. سردبیر A. M. Prokhorov. 1983 ... دایره المعارف فیزیکی

مجموعه ای از روش ها برای مطالعه اجسام کوچک با استفاده از میکروسکوپ. انواع سنتی M. عبارتند از – M. درخشان – بر اساس پدیده فوتولومینسانس که هنگام رنگ‌آمیزی فرآورده‌ها با رنگ‌های درخشان خاص رخ می‌دهد. فرهنگ لغت میکروبیولوژی

طرح میکروسکوپ میدان تاریک در نور فرودی نور نمونه از کنار (خط سبز) می باشد. تصویر توسط نور پراکنده شده توسط ناهمگنی در نمونه ایجاد می شود. میکروسکوپ میدان تاریک یک نوع نوری ... ویکی پدیا

روشی برای مطالعه اجسام زنده با کنتراست پایین (تک یاخته‌ها، باکتری‌ها، سلول‌های موجود در کشت) با استفاده از میکروسکوپ آنوپترال (اختراع شده در سال 1953 توسط فیزیولوژیست فنلاندی A. Wilska)، نوعی میکروسکوپ کنتراست فاز... دایره المعارف بزرگ شوروی

روش های مطالعه اجسام مختلف با استفاده از میکروسکوپ. در زیست شناسی و پزشکی، این روش ها امکان مطالعه ساختار اجسام میکروسکوپی را که ابعاد آنها فراتر از قدرت تفکیک چشم انسان است را فراهم می کند. اساس M.m.i. مقدار... ... دایره المعارف پزشکی

3. عوامل ایجاد کننده اشریشیوز. طبقه بندی. مشخصه. نقش اشرشیاکلی در شرایط طبیعی و پاتولوژیک. تشخیص میکروبیولوژیکی اشریشیوز رفتار.

2. ساختار ژنوم باکتری. مفهوم ژنوتیپ و فنوتیپ. انواع تنوع.

3. عوامل ایجاد کننده هپاتیت a، b و c. طبقه بندی. مشخصه. تشخیص آزمایشگاهی. پیشگیری خاص

1.اصول اساسی طبقه بندی میکروب ها.

1.اصول طبقه بندی قارچ.

2. عوامل خارج کروموزومی وراثت.

3. عامل بیماری سیاه زخم. طبقه بندی و ویژگی ها تشخیص میکروبیولوژیک پیشگیری و درمان خاص

1. خواص مورفولوژیکی باکتری ها.

3. عامل بورلیوزیس. طبقه بندی. مشخصه. تشخیص میکروبیولوژیک

2. مکمل، ساختار آن، عملکردها، مسیرهای فعال سازی، نقش در ایمنی. ماهیت و ویژگی های مکمل

1.اصول طبقه بندی تک یاخته ها.

1. ویژگی های مورفولوژی ویروس ها.

2. عوامل غیر اختصاصی دفاعی بدن.

2. ایمونوگلوبولین ها، ساختار و عملکرد.

3. پاتوژن های ARVI. طبقه بندی. مشخصه. تشخیص آزمایشگاهی. پیشگیری و درمان خاص

2. آنتی ژن ها: تعریف، خواص اساسی. آنتی ژن های سلول های باکتریایی

3. سودوموناس آئروژینوزا. طبقه بندی. مشخصه. تشخیص و درمان میکروبیولوژیکی

1. خواص رنگی باکتری ها. روش های نقاشی

1.روش های میکروسکوپی (شورنما، میدان تاریک، فاز-کنتراست، الکترون).

2. واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال. اجزاء. کاربرد.

1. رشد و تولید مثل باکتری ها. مراحل تولید مثل:

1. راه های بدست آوردن انرژی باکتری ها (تنفس، تخمیر):

1. اصول اولیه کشت باکتری:

2. مطالعه بهداشتی و میکروبیولوژیکی خاک. تعداد میکروبی، تیتر کلی، تیتر خاک پرفرنجنس.

1. رسانه های مغذی مصنوعی، طبقه بندی آنها. الزامات برای محیط های غذایی

3. عوامل ایجاد کننده کلامیدیا. طبقه بندی. مشخصه. تشخیص میکروبیولوژیک رفتار.

1. Dysbiosis. دیس باکتریوز آماده سازی برای بازگرداندن میکرو فلور طبیعی: پروبیوتیک ها، یوبیوتیک ها.

1. تأثیر عوامل فیزیکی و شیمیایی بر میکروارگانیسم ها. مفهوم استریلیزاسیون، ضدعفونی، آسپسیس و ضد عفونی کننده ها. تاثیر عوامل فیزیکی

2. آزمایشات سرولوژیکی که برای تشخیص عفونت های ویروسی استفاده می شود.

1. مفهوم عفونت. شرایط برای وقوع یک فرآیند عفونی.

3. عامل بیماری کزاز. طبقه بندی و ویژگی ها تشخیص و درمان میکروبیولوژیکی

3. عامل بیماری تیفوس. طبقه بندی. مشخصه. بیماری بریل زینسر تشخیص میکروبیولوژیک پیشگیری و درمان خاص

3. عامل بیماری تیفوس منتقله از طریق کنه.

1. ویژگی های سموم باکتریایی.

3. عامل بیماری آبله. طبقه بندی. مشخصه. تشخیص آزمایشگاهی. پیشگیری خاص از آبله

3. طبقه بندی مایکوزها (قارچ ها). مشخصه. نقش در آسیب شناسی انسان تشخیص آزمایشگاهی. رفتار.

1. میکرو فلور هوا و روش های تحقیق آن. میکروارگانیسم های شاخص بهداشتی هوا.

1.روش های میکروسکوپی (شورنما، میدان تاریک، فاز-کنتراست، الکترون).

میکروسکوپ فلورسانسبر اساس توانایی تعدادی از مواد با منشاء بیولوژیکی یا برخی از رنگ ها در درخشش تحت تأثیر نوری که بر روی آنها می افتد. میکروارگانیسم های حاوی کلروفیل، ویتامین B12، آلکالوئیدها و برخی آنتی بیوتیک ها دارای لومینسانس اولیه هستند. سلول های میکروارگانیسم هایی که در آنها لومینسانس ضعیف یا وجود ندارد با رنگ های مخصوص - فلوروکروم ها (پرتقال آکریدین، پریمولین، رودامین و غیره) به شکل محلول های آبی بسیار رقیق شده درمان می شوند: 1:500 -1:100000. چنین محلول هایی کمی سمی هستند، که امکان مطالعه یک سلول دست نخورده را فراهم می کند.

میکروسکوپ میدان تاریکبر اساس روشن کردن یک جسم با پرتوهای مایل نور (اثر Tyndall). با چنین نوری، پرتوها وارد لنز نمی شوند، بنابراین میدان دید تاریک به نظر می رسد. اگر آماده سازی آزمایش حاوی سلول های میکروبی باشد، پرتوهای مورب از سطح آنها منعکس شده، از جهت اصلی خود منحرف شده و وارد عدسی می شوند. اشیاء درخشان در پس زمینه ای به شدت سیاه قابل مشاهده هستند. چنین روشنایی آماده سازی با استفاده از یک کندانسور میدان تاریک ویژه به دست می آید که جایگزین کندانسور معمولی یک میکروسکوپ میدان روشن می شود.

هنگام میکروسکوپی در یک میدان تاریک، می توانید اجسامی را ببینید که اندازه آنها در صدم میکرومتر اندازه گیری می شود که فراتر از وضوح یک میکروسکوپ میدان روشن معمولی است. با این حال، مشاهده اشیاء در یک میدان تاریک به فرد اجازه می دهد تا تنها خطوط سلولی را بررسی کند و امکان بررسی ساختار داخلی آنها را فراهم نمی کند.

میکروسکوپ کنتراست فازدر درجه اول به این دلیل ارزشمند است که می توان از آن برای مشاهده اجسام زنده ای که دارای ضریب شکست نزدیک به ضریب شکست محیط هستند استفاده کرد. هیچ سودی از نظر بزرگ‌نمایی تصویر جسم وجود ندارد، اما اشیاء شفاف واضح‌تر از نور عبوری یک میکروسکوپ میدان روشن معمولی دیده می‌شوند. در غیاب میکروسکوپ ویژه، یک میکروسکوپ نوری معمولی می‌تواند به یک دستگاه کنتراست فاز ویژه مجهز شود که تغییرات فاز امواج نوری را که از یک جسم عبور می‌کنند به امواج دامنه تبدیل می‌کند. در نتیجه اشیاء شفاف زنده متضاد می شوند و در میدان دید قابل مشاهده می شوند.

با استفاده از میکروسکوپ فاز-کنتراست، شکل، اندازه، موقعیت نسبی سلول‌ها، تحرک، تولید مثل، جوانه‌زنی هاگ‌های میکروارگانیسم‌ها و غیره بررسی می‌شود.

بر اساس تبدیل تغییرات فاز نامرئی در امواج نور وارد شده توسط یک جسم به تغییرات دامنه قابل مشاهده برای چشم.

میکروسکوپ الکترونی. به شما امکان می دهد اجسامی را مشاهده کنید که ابعاد آنها فراتر از وضوح یک میکروسکوپ نوری (0.2 میکرون) است. یک میکروسکوپ الکترونی برای مطالعه ویروس ها، ساختار ظریف میکروارگانیسم های مختلف، ساختارهای ماکرومولکولی و سایر اجسام زیر میکروسکوپی استفاده می شود.

یک میکروسکوپ الکترونی عبوری معمولی شبیه به یک میکروسکوپ نوری است، با این تفاوت که جسم توسط یک شار نوری تابش نمی‌شود، بلکه توسط پرتوی از الکترون‌های تولید شده توسط نورافکن الکترونی خاص تابش می‌شود. تصویر حاصل با استفاده از یک سیستم لنز بر روی یک صفحه فلورسنت پخش می شود. بزرگنمایی یک میکروسکوپ الکترونی عبوری می تواند به یک میلیون برسد، با این حال، برای میکروسکوپ های نیروی اتمی این محدودیت نیست.

میکروسکوپ کنتراست فاز کنتراست اجسامی را که به نور شفاف هستند به میزان قابل توجهی افزایش می دهد و در پزشکی برای مطالعه داروهای بومی استفاده می شود. با استفاده از این روش، اجسام بی رنگ و شفاف و قطعاتی که ساختار آنها از نظر اپتیکی تفاوت کمی با یکدیگر دارند، بدون پیش پردازش قابل بررسی هستند.

آماده سازی رنگی تا حدی نور را جذب می کند. پرتو نوری که از چنین آماده سازی عبور می کند شدت خود را از دست می دهد، یعنی. دامنه موج نور کاهش می یابد و این به راحتی توسط چشم محقق تشخیص داده می شود. چنین آماده سازی ها حتی در یک میکروسکوپ معمولی نیز متضاد هستند و "دامنه" نامیده می شوند. آماده سازی هایی که نور را جذب نمی کنند شفاف هستند. پرتو نوری که از چنین آماده سازی عبور می کند، شدت خود را از دست نمی دهد. دامنه موج نور تغییر نمی کند، اما فقط فاز نوسان تغییر می کند که توسط چشم انسان ثبت نمی شود. چنین اجسامی را اجسام فاز می نامند. این شامل آماده سازی زنده و بدون رنگ است. برای افزایش کنتراست تصویر، باید تغییرات فاز را به تغییرات دامنه تبدیل کرد. این کار با قرار دادن یک صفحه فاز حلقه ای شکل در لنزها و استفاده از دیافراگم حلقوی به دست می آید. هر لنز دیافراگم مخصوص به خود را دارد. تصویر این دیافراگم با حلقه صفحه فاز لنز مربوطه منطبق است. روش کنتراست فاز می تواند مثبت یا منفی باشد. در حالت اول تصویری تاریک از جسم در پس زمینه روشن میدان مشاهده می شود و در حالت دوم پس زمینه تاریک و جسم روشن است. بهترین نتایج در مورد کنتراست مثبت مشاهده می شود.

انتشار امواج نور در اجسام همگن شفاف با کاهش شدت نور همراه نیست. فقط سرعت جریان نور در جسم در مقایسه با سرعت انتشار نور در محیط تغییر می کند. بسته به اینکه ضریب شکست جسم به ترتیب کمتر یا بیشتر از محیط باشد، بیشتر یا کمتر خواهد بود. این تغییرات که در غیر این صورت تغییرات فاز نامیده می شود، زیرا در طی آنها فقط فاز نوسانات نور عبوری تغییر می کند، مشخصه اکثر اجسام بیولوژیکی (سلول های زنده، بخش های بافت و غیره) است.

چشم انسان در تشخیص تغییرات شدت نور که هنگام عبور از آماده‌سازی‌های رنگی (دامنه)، هنگامی که دامنه نوسانات نور تغییر می‌کند، خوب است. با این حال، چشم قادر به درک تغییرات فاز در نور نیست. بنابراین، اجسام شفاف غیر کنتراست (فاز) در طول بررسی معمولی میکروسکوپی نامرئی می مانند.

برای کار با استفاده از روش کنتراست فاز، علاوه بر یک میکروسکوپ بیولوژیکی معمولی، باید یک دستگاه مخصوص نیز داشته باشید. نصب دستگاه به شرح زیر است. کندانسور و لنز با فاز جایگزین می شوند. کندانسور فاز با چرخاندن دیسک برجک روی 0 تنظیم می شود.این موقعیت مربوط به یک کندانسور میدان نور معمولی است. سپس با قرار دادن نمونه روی صحنه و متمرکز کردن آن، شروع به تنظیم نور می کنند. هنگام مطالعه با استفاده از روش کنتراست فاز، شرط اصلی روشنایی بهینه است که با تنظیم نور طبق کوهلر به دست می آید. پس از این، دیسک برجک را به عددی که مربوط به لنز انتخابی است تنظیم کنید. به عنوان مثال با یک لنز ´40 عدد 40 نیز در پنجره تنظیم می شود. پس از برداشتن چشمی، یک میکروسکوپ کمکی در جای خود نصب می شود و بر روی تصویر دو حلقه (دیافراگم حلقوی کندانسور و صفحه فاز) تنظیم می شود. . تراز حلقه ها با استفاده از دستگاه مرکزی کندانسور به دست می آید. با تعویض میکروسکوپ کمکی با چشمی، می توانید آماده سازی را بررسی کنید.

روش کنتراست آنوپترال یک پیشرفت در روش کنتراست فاز است. توجیهات نظری و ویژگی های طراحی دستگاه آنوپترال اساساً با نصب متداول فاز-کنتراست تفاوتی ندارد (شکل 6). اصل طراحی آن به شرح زیر است. حلقه‌ای از دوده روی سطح بالایی عدسی ماقبل آخر هدف غوطه‌وری اعمال می‌شود و اجازه می‌دهد تنها حدود 10 درصد از نور عبوری از آن عبور کند. یک دیافراگم حلقوی در صفحه کانونی جلویی کندانسور قرار داده شده است که تصویر آن باید کاملاً با حلقه دوده روی لنز منطبق باشد. نمونه با یک مخروط کامل از پرتوهایی که از دیافراگم حلقوی کندانسور عبور می کند روشن می شود. در غیاب اشیاء (مثلاً میکروب ها در آماده سازی) فقط پرتوهای پراش نشده وارد عدسی می شوند که دامنه آنها پس از عبور از حلقه دوده 90٪ کاهش می یابد. در عین حال، دامنه پرتوهای پراش شده توسط ذرات جسمی که از حلقه دوده عبور می کنند تغییر نمی کند و بنابراین زمینه میدان تیره و ذرات جسم روشن می شود. مزیت روش میکروسکوپ آنوپترال وضوح بالای لنزها و توانایی تشخیص حداقل تفاوت چگالی نوری در آماده سازی های رنگ نشده است. هر چه چگالی نوری یک جسم بیشتر باشد، تصویر آن روشن تر است. روش استفاده از دستگاه هیچ تفاوتی با کنتراست فاز ندارد. با استفاده از میکروسکوپ آنوپترال، می توانید مورفولوژی و محلی سازی نوکلوئیدها (دستگاه هسته ای) را مطالعه کنید و تغییرات مورفولوژی باکتری ها را در طول رشد و تولید مثل طبیعی مشاهده کنید.

اطلاعات میکروسکوپ کنتراست فاز

برنامه درسی زیست شناسی دبیرستان شامل مشاهدات سلول های گونه است. برای انجام این کار، دانش آموز از یک خلال دندان صاف استفاده می کند تا به دقت لایه را از سطح داخلی گونه بتراشد. نمونه بر روی یک لام شیشه ای قرار می گیرد و با یک درب پوشانده می شود. سلول های گونه اپیتلیال هستند و به تعداد زیاد دیده می شوند. اگر یک قطره ید به نمونه اضافه کنید، هسته های سلولی بیشتر نمایان می شوند. آنها به صورت نقاط گرد کوچک در داخل سلول ظاهر می شوند. عکس سمت چپ نشان می دهد که سلول های بدون ید در زیر میکروسکوپ معمولی چه شکلی هستند. در سمت راست همان نمونه را می بینید که در زیر یک میکروسکوپ کنتراست فاز مشاهده می شود (در واقع از همان میکروسکوپ استفاده شده است، اما از زاویه ای متفاوت). این تصاویر به وضوح بهبود قابل توجه کیفیت تصویر برخی از نمونه ها را هنگام استفاده از میکروسکوپ کنتراست فاز نشان می دهد.

کنتراست فاز چیست؟

کنتراست فاز روشی است که در اوایل قرن بیستم توسط فریتز زرنیک توسعه یافت. زرنیک کشف کرد که اگر نور در یک خط مستقیم شتاب بگیرد، می تواند باعث تداخل مدل مخرب در تصویری شود که در حال مشاهده است. این مدل ها با برجسته کردن عناصر در پس زمینه روشن، جزئیات بیشتری را به تصویر اضافه می کنند. برای ایجاد تداخل در الگو، زرنیک سیستمی از حلقه‌ها را طراحی کرد که هم در عدسی شیئی و هم در خازن قرار دارند. هنگامی که به درستی تنظیم شود، امواج نوری ساطع شده از منبع نور با تغییر فاز ? طول موج تصویر نمونه بسیار بهتر می شود. این روش فقط برای نمونه هایی که نور را جذب نمی کنند (به نام "اشیاء فاز") مفید است و برای مشاهده جزئیات در برخی نمونه ها مانند بخش هایی از سلول های تک یاخته ای، باکتری ها، تاژک های اسپرم و سایر سلول هایی که نور را جذب نمی کنند بسیار عالی است. . این روش برای میکروسکوپ به قدری پیشرفته بود که زرنیک در سال 1953 جایزه نوبل فیزیک را دریافت کرد. بیوگرافی فریتز زرنیک را می توان یافت.

نصب میکروسکوپ برای مشاهدات کنتراست فاز.

برای تنظیم یک میکروسکوپ برای مشاهدات کنتراست فاز، به لنزهای شیئی کنتراست فاز و یک خازن کنتراست فاز نیاز دارید.

همه میکروسکوپ های کنتراست فاز یکسان ایجاد نمی شوند، اما به طور کلی از روش های مشابهی برای راه اندازی سیستم برای تولید نتایج بهینه استفاده می کنند. در سیستم نشان داده شده در سمت راست، خازن فاز دارای پنج موقعیت (10x، 20x، 40x، 100x و BF) BF - "Brightfield" - بدون فاز است.

برای راه اندازی میکروسکوپ با اپتیک فاز، ابتدا آن را روی BF قرار دهید و روی نمونه تمرکز کنید. برای بدست آوردن بهترین تصویر، ارتفاع کندانسور را تنظیم کنید. سپس کندانسور را در موقعیت مربوط به لنز قرار دهید و نمونه را بردارید. تنظیم کننده ها در هر دو طرف دیواره عقب کندانسور برای مرکز آن طراحی شده اند.

پس از این، باید چشمی را بردارید و آن را با یک تلسکوپ مرکزی جایگزین کنید. برای فوکوس کردن لنز از پیچ تنظیم استفاده می شود. با نگاه کردن از طریق لنز، دو حلقه را خواهید دید. آنها ممکن است متحدالمرکز باشند یا نباشند. با چرخاندن پیچ تنظیم مرکز کندانسور، حلقه ها را به گونه ای تراز کنید که هم مرکز باشند (شکل زیر را ببینید).
در نهایت تلسکوپ مرکزی را با یک چشمی تعویض کنید. نمونه را روی یک اسلاید شیشه ای قرار دهید. اکنون می توانید شروع به مشاهدات کنید. هنگام تعویض لنز، باید روش مرکز کردن را تکرار کنید (اگرچه ممکن است مرکز کردن در تمام لنزها یکسان باشد).

/ Badyaeva E.E. // موضوعات منتخب معاینه پزشکی قانونی. - خاباروفسک، 2018 - شماره 17. - ص 34-37.

KGBUZ "دفتر معاینه پزشکی قانونی" وزارت بهداشت منطقه خاباروفسک (رئیس - دکتری A.V. Nesterov)، خاباروفسک

استفاده از میکروسکوپ فاز کنتراست برای شناسایی خونریزی در بافت های پوسیدگی

شرح کتابشناختی:
استفاده از تکنیک میکروسکوپ فاز-کنتراست برای شناسایی خونریزی در بافت‌های گندیده / Badyaeva E.E. // موضوعات منتخب معاینه پزشکی قانونی. - خاباروفسک، 2018. - شماره 17. - ص 34-37.

کد html:
/ Badyaeva E.E. // موضوعات منتخب معاینه پزشکی قانونی. - خاباروفسک، 2018. - شماره 17. - ص 34-37.

جاسازی کد برای انجمن:
استفاده از تکنیک میکروسکوپ فاز-کنتراست برای شناسایی خونریزی در بافت‌های گندیده / Badyaeva E.E. // موضوعات منتخب معاینه پزشکی قانونی. - خاباروفسک، 2018. - شماره 17. - ص 34-37.

ویکی:
/ Badyaeva E.E. // موضوعات منتخب معاینه پزشکی قانونی. - خاباروفسک، 2018. - شماره 17. - ص 34-37.

تعیین طول عمر و مدت تشکیل آسیب مکانیکی یکی از مشکلات مبرم پزشکی قانونی است. اگر بافت‌های جسد در حالت تغییرات پوسیدگی باشند، تشخیص طول عمر و مدت تشکیل خونریزی بسیار پیچیده‌تر می‌شود. این به دلیل تغییراتی است که تحت تأثیر آنزیم های پروتئولیتیک رخ می دهد. در طی اتولیز، سیتوپلاسم سلول ها تورم می کند، اندازه مطلق آن افزایش می یابد، هسته سلول ها سبک تر می شوند و اندازه آنها کاهش می یابد. با ادامه تورم سیتوپلاسم، مرزهای سلولی نامشخص می شود و سیتوپلاسم ظاهری دانه ای به خود می گیرد. فرآیند تورم سلولی با چروک شدن آنها و کاهش اندازه مطلق آنها جایگزین می شود، در حالی که شدت درک سیتوپلاسم از رنگ های اسیدی افزایش می یابد.

در حالت تغییرات پوسیدگی مشخص، سلول توانایی رنگ‌آمیزی خود را از دست می‌دهد.

میکروسکوپ آماده سازی با تغییرات اتولیتیک و پوسیدگی تحت بزرگنمایی کم و زیاد برای شناسایی ساختارهای مشخصه و تعیین وابستگی بافت ها و اندام های ارائه شده برای تحقیق انجام می شود.

در پوست، تغییرات اتولیتیک در درجه اول در تشکیلات غده ای پوست (غدد چربی و عرق) و سپس در اپیدرم رخ می دهد. ساختارهای فیبری در برابر اتولیز مقاومت بیشتری دارند. در اپیدرم، مرزهای تار بین سلول ها، بازوفیلی سیتوپلاسم و رنگ پریده هسته ها مشاهده می شود.

در ماهیچه های اسکلتی، با برطرف شدن ریگور مورتیس، تغییرات اتولیتیک به شکل کدورت، دانه بندی و همگن شدن میوپلاسم آشکار می شود. در این حالت، هسته ها تحت لیز قرار می گیرند.

شل شدن و تورم انتیما در عروق مشاهده می شود. هسته ها pyknotic یا لیز هستند. هموگلوبین در گلبول های قرمز شسته می شود و آنها ضعیف با ائوزین رنگ می شوند، خطوط آنها برای مدتی باقی می ماند، سپس به ساختارهای مشبک تبدیل می شوند و هنگامی که گلیکوژن آزاد می شود، خطوط گلبول های قرمز تفاوتی نمی کند.

اهمیت پزشکی قانونی معاینه بافت‌شناسی بافت‌های پوسیده نه تنها به تعیین وابستگی اندام و بافت، بلکه به امکان تعیین طول عمر خونریزی‌ها نیز محدود می‌شود. برای شناسایی خونریزی در بافت های پوسیدگی از تکنیک رنگ آمیزی لپنا استفاده می شود. این تکنیک بر اساس شناسایی فعالیت پراکسیداز هموگلوبین در بافت ها با رنگ آمیزی مقاطع با محلول بنزیدین و پراکسید هیدروژن است؛ گلبول های قرمز و هموگلوبین با این رنگ آمیزی باید قهوه ای تیره شوند. در عمل، رنگدانه هموگلوبین به رنگ های زرد قهوه ای، قهوه ای-قهوه ای، زرد-سبز رنگ آمیزی می شود. سیتوپلاسم به رنگ خاکستری مایل به آبی کم رنگ و بژ کم رنگ رنگ می شود. با تغییرات پوسیدگی مشخص در بافت ها، میکرو فلور باکتریایی و قارچی گندیده فراوان، می توان واکنش لپنا منفی کاذب را به دست آورد (رنگ آمیزی منفی در هنگام خونریزی). بنابراین، در حال حاضر هیچ روش کاملی برای تشخیص خونریزی در بافت های در معرض تغییرات پوسیدگی وجود ندارد.

ما تجربه مثبتی در استفاده از میکروسکوپ فاز-کنتراست در مطالعه خونریزی در بافت های پوسیدگی به دست آورده ایم. استفاده از این روش نه تنها وجود خونریزی در بافت ها، بلکه میزان شدت آنها را نیز ممکن می سازد. روش کنتراست فاز بر این واقعیت استوار است که سرعت فاز نور با ضریب شکست نسبت معکوس دارد. فاز پرتوی که از جسمی با ضریب شکست بالاتر از محیط اطراف عبور می کند در مقایسه با فاز پرتویی که فقط از محیط می گذرد به تأخیر می افتد. چشم قادر به درک تغییرات فاز نور نیست. بنابراین، اجسام شفاف و کم کنتراست در طول معاینه میکروسکوپی معمولی نامرئی می مانند. در یک میکروسکوپ کنتراست فاز، یک کندانسور ویژه و یک عدسی با طراحی خاص، تغییرات فاز امواج نور را تنظیم می‌کند و اختلاف فاز را به تفاوت در شدت نور تبدیل می‌کند و جزئیات ساختار جسم را برای چشم قابل مشاهده می‌کند. سیستمی از حلقه‌ها در کندانسور و عدسی آن پرتوهایی را که در شیء منحرف شده‌اند از آن‌هایی که نبوده‌اند جدا می‌کند. پس از عبور پرتوهای دیافراگم از صفحه فاز لنز، که یک تغییر فاز اضافی ایجاد می کند، با پرتوهای غیر دیافراگمی دوباره ترکیب می شوند. به این ترتیب می توان کنتراست سلول ها یا ساختارهای درون سلولی را به طور چشمگیری افزایش داد. در صورت تغییرات گندیده در بافت ها، میکروسکوپ فاز کنتراست تشخیص هویت بافت ها و ساختار آنها را آسان می کند.

عکس. 1. تمرکز اشباع هموراژیک در استرومای بینابینی. رنگ آمیزی هماتوکسیلین-ائوزین (سمت چپ).

عکس. 1. تمرکز اشباع هموراژیک در استرومای بینابینی. لکه لپنا (راست)

برنج. 2. کانون اشباع هموراژیک در استرومای بینابینی.
میکروسکوپ کنتراست فاز

در نوامبر 2018، آزمایشگاه موادی را از جسدی دریافت کرد که از سال 2017 در زمین بود. اندام‌ها و بافت‌های او در وضعیت تغییرات پوسیدگی مشخص قرار داشتند. در طی رنگ‌آمیزی استاندارد بافت‌ها و اندام‌ها، کانون‌های رنگ‌آمیزی قهوه‌ای رنگ، یادآور خونریزی‌ها، در یکی از میکرواسلایدها یافت شد. ساختارهای فیبری به رنگ صورتی مایل به یاسی کثیف رنگ آمیزی شدند، ساختار سلولی-هسته ای مشخص نشد، در دایره عروق گشاد شده و پر خون با کالیبر متوسط، کانون های کوچکی از اشباع خونریزی در استرومای بینابینی، بدون اتصال مشاهده شد. با رگ ها واکنش لپنا به شکل توده های ریزدانه قهوه ای کم رنگ کانونی ارائه شد که در برابر پس زمینه عمومی زرد روشن به خوبی قابل تشخیص نیستند (شکل 1). با میکروسکوپ فاز-کنتراست، خونریزی‌ها به صورت توده‌های دانه‌ای که به خوبی در ارتباط با بافت‌های اطراف ظاهر شده بودند، ارائه شدند (شکل 2).

این مثال به وضوح نشان می دهد که تحقیقات فاز-کنتراست در بافت های تغییر یافته و آسیب دیده به طور فاسد کمک می کند:

تعیین محل خونریزی در بافت؛

تعیین حجم نفوذ بافت توسط گلبول های قرمز (زندگی حیاتی).

استفاده از این روش همچنین به شما امکان می دهد در رنگ آمیزی میکرو اسلایدها صرفه جویی کنید و استفاده از آنها را با روش کنتراست فاز جایگزین کنید، که در شرایط کمبود بودجه برای بخش های بافت شناسی، به شما امکان می دهد اولویت ها را برای خرید برنامه ریزی شده مواد و معرف ها تعیین کنید.